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文檔簡介
1、氟化物的長期、廣泛使用可能導(dǎo)致耐氟菌株的產(chǎn)生,為齲病的防治提出了新的挑戰(zhàn)。為探索耐氟菌株部分致齲毒力的改變,以及其與親代菌株相比在基因表達(dá)水平上是否存在差異,本實驗選擇遠(yuǎn)緣鏈球菌6715為研究對象,采用細(xì)菌培養(yǎng)、耐氟誘導(dǎo)、生理生化鑒定、抑制性消減雜交等微生物學(xué)和分子生物學(xué)方法,探討耐氟菌株的適應(yīng)性耐酸能力及耐氟突變過程中,基因表達(dá)的改變。 一.遠(yuǎn)緣鏈球菌6715耐氟菌株的體外誘導(dǎo)及鑒定采用逐步誘導(dǎo)法在體外誘導(dǎo)了遠(yuǎn)緣鏈球菌6715
2、的耐氟菌株,該菌株可在高氟水平(1000微克/毫升)中生存,且在無氟培養(yǎng)基中連續(xù)傳代二十次,其耐氟特性不消失。經(jīng)形態(tài)學(xué)研究和生理生化鑒定,發(fā)現(xiàn)耐氟菌株與親代菌株具有相似的形態(tài),且兩者均可發(fā)酵甘露醇、七葉苷、棉子糖及精氨酸,但在發(fā)酵甘露醇時,耐氟菌株出現(xiàn)遲緩發(fā)酵,反應(yīng)陽性出現(xiàn)時間較親代菌株晚24小時。 二.遠(yuǎn)緣鏈球菌6715耐氟菌株與親代菌株適應(yīng)性耐酸能力的比較研究適應(yīng)性耐酸被認(rèn)為是影響細(xì)菌生存及致齲性的重要因素。它是指對數(shù)期生長
3、的細(xì)菌在亞致死性的低pH值環(huán)境中生長后,可抵抗致死性酸化的殺傷,產(chǎn)生適應(yīng)性耐酸的能力。通過比較研究發(fā)現(xiàn):S.6715耐氟菌株較親代具有更強的適應(yīng)性耐酸能力。在預(yù)酸化pH值為5.0時,其最大生存率10.55%. 三.遠(yuǎn)緣鏈球菌6715耐氟菌株與親代菌株基因表達(dá)差異的比較研究為了解遠(yuǎn)緣鏈球菌6715耐氟菌株(FR-6715)與親代菌株(S.6715)基因表達(dá)的差異,本研究采用抑制性消減雜交技術(shù)得到遠(yuǎn)緣鏈球菌6715耐氟菌株菌細(xì)胞中
4、表達(dá)顯著增強的片段,經(jīng)對比確定為結(jié)構(gòu)基因fruA和SMU.438c,fruA編碼的果糖水解酶,可以利用胞外多糖中的果糖多聚體這一碳源儲庫,通過無氧酵解的方式,進行產(chǎn)酸致齲,可能是主要致齲基因之一。SMU.438c基因為一段長約200bp的核苷酸序列,其具體功能尚未明確,推斷與鏈球菌代謝機制相關(guān)。 綜合分析,本研究發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)緣鏈球菌6715耐氟菌株與親代菌株相比,具有更強的致齲毒力,且在耐氟突變過程中,fruA和SMU.438c基因表
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