內(nèi)皮素-1在急性甲醇中毒致視功能損害中的作用研究.pdf

1、甲醇(metllanol，CH<,3>OH)是一種有毒的揮發(fā)性液體，略有乙醇味，正常酒和飲料中含有微量。作為一種常用的有機溶劑和化工原料，甲醇廣泛應用于各種工業(yè)產(chǎn)品，與我國工業(yè)的發(fā)展緊密聯(lián)系。由于相關(guān)法規(guī)尚未健全，在我國因誤服假酒而致急性甲醇中毒的事故時有發(fā)生。隨著甲醇在人們生產(chǎn)、生活中應用越來越廣泛，其意外中毒的可能性也不斷增高。甲醇中毒致死、致殘率和失明率相當高，嚴重危害人們的視覺健康和生命安全，給社會、家庭和個人帶來了巨大的經(jīng)濟和

2、精神負擔。目前國內(nèi)的報道局限于對臨床病例的討論，由于缺乏相關(guān)的實驗研究，其確切的毒理及轉(zhuǎn)歸機制未能得到深入探討；治療方面，臨床上多采用激素、神經(jīng)營養(yǎng)、改善循環(huán)等綜合療法，但缺乏特異、高效的針對性藥物和救治措施，因此有必要對甲醇中毒致視功能損害作更深入研究。本研究首先建立急性甲醇中毒的動物模型，以形態(tài)學和功能學系列指標評價模型，并從血管活性物質(zhì)內(nèi)皮素-1表達的角度探討視覺系統(tǒng)損害的可能機制，為臨床治療提供新的思路。 第一部分急性甲

3、醇中毒大鼠模型的制作及評價 目的：探討急性甲醇中毒大鼠模型的制作方法、眼部改變及模型評價指標，為進一步研究急性甲醇中毒致視功能損害的發(fā)病機理建立基礎(chǔ)。 方法：SD大鼠32只，隨機分為A(低劑量甲醇組)、B(高劑量甲醇組)、C(生理鹽水對照組)、D(空氣對照組)四組，每組8只。A、B組吸入N<,2>O/O<,2>混合氣及不同劑量甲醇灌胃，C組吸入N<,2>O/O<,2>混合氣及生理鹽水灌胃，D組置于正?？諝庵胁碆組劑量給

4、予甲醇灌胃，借鑒人類甲醇中毒的診斷標準制訂該模型的評價指標，觀察各組大鼠一般情況、體重及眼部改變、靜脈血甲醇濃度、視網(wǎng)膜電圖和視網(wǎng)膜組織學改變。 結(jié)果：吸入N<,2>O/O<,2>混合氣及甲醇灌胃后的大鼠出現(xiàn)典型的急性甲醇中毒癥狀，表現(xiàn)為反應遲鈍、運動失調(diào)、體重減輕；視盤水腫，眼底動脈迂曲變細，視網(wǎng)膜水腫、出血；視網(wǎng)膜電圖在第36 h開始出現(xiàn)異常，表現(xiàn)為a、b波振幅降低；至第60 h，A組a波振幅(87.41±13.46)μV、

5、b波振幅(186.66±37.84)μv，B組a波振幅(53.34.±19.44)μV、b波振幅(131.52±38.98)μV，與對照組相比明顯下降(P<0.05)；光鏡下視網(wǎng)膜各層細胞水腫、排列紊亂及空泡化；電鏡下光感受器膜盤排列紊亂，細胞凋亡，線粒體腫脹、嵴斷裂或消失；B組動物上述異常改變尤其明顯。C、D對照組動物各項檢測指標均正常。 結(jié)論：吸入N<,2>O/O<,2>混合氣及甲醇灌胃可成功建立急性甲醇中毒的大鼠模型，中

6、毒表現(xiàn)與人類十分接近，出現(xiàn)典型的視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)和功能異常改變，是一種較理想的動物模型。 第二部分內(nèi)皮素-1 在急性甲醇中毒致視功能損害中的作用探討 目的：觀察內(nèi)皮素-1(ET-1)在急性甲醇中毒大鼠視網(wǎng)膜的時空表達情況，探討其在視功能損害中的可能作用機制，為臨床治療提供合理用藥的依據(jù)。 方法：對吸入N<,2>O/O<,2>混合氣及甲醇灌胃大鼠和對照組大鼠取不同時間點作視網(wǎng)膜振蕩電位檢查，計算各個子波振幅的總和∑O作

7、比較；采用免疫組織化學和酶聯(lián)免疫吸附法對甲醇中毒組大鼠和對照組大鼠不同時間點視網(wǎng)膜ET-1的表達情況作定性及定量分析，對∑O與ET-1之間的變化關(guān)系作相關(guān)分析。 結(jié)果：高劑量甲醇灌胃組動物視網(wǎng)膜振蕩電位∑O早在第12h即出現(xiàn)改變，第36 h低劑量組動物也開始出現(xiàn)∑O異常?！芆隨著甲醇灌胃次數(shù)及時間的延長而明顯降低(P<0.05)，高劑量組尤其顯著。停止甲醇灌胃回到正常飼養(yǎng)環(huán)境后，∑O有一定程度改善但未能恢復至實驗前水平，與對照組

8、相比仍有明顯差異(P<0.05)。免疫組化結(jié)果顯示，灌胃前各組大鼠視網(wǎng)膜未見ET-1陽性表達，自第12 h起，ET-1在中毒動物視網(wǎng)膜表達迅速增加，較廣泛地分布于光感受器、內(nèi)外叢狀層、內(nèi)核層和神經(jīng)節(jié)細胞層；第60 h后，ET-1表達開始減弱，且在回到正常環(huán)境48 h后迅速下降，但視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)的損害持續(xù)存在。酶聯(lián)免疫吸附測定結(jié)果顯示，中毒動物視網(wǎng)膜ET-1表達在第12 h開始迅速增加，至第36 h達到高峰，低劑量組為(6.626±2.4

9、21)pmol/ml，高劑量組為(10.831±1.706)pmol/ml，與對照組相比有顯著差異(P<0.05)，此后迅速降低，停止灌胃后ET-1回落至較低水平，高劑量組為(2.297±0.664)pmol/ml，低劑量組為(1.104±0.281)pmol/ml，后者與對照組無明顯差異；Spearman相關(guān)分析顯示ET-1表達與Ops∑O的變化呈負相關(guān)(r=0.8302，P<0.0001)。 結(jié)論：急性甲醇中毒大鼠視網(wǎng)膜血液