腦苷肌肽結(jié)合甲鈷胺治療大鼠有機磷中毒遲發(fā)性神經(jīng)病的效果研究.pdf

1、目的:有機磷中毒遲發(fā)性神經(jīng)病(organophosphate induced delayedneuropathy，OPIDN)是農(nóng)藥中毒后的嚴重并發(fā)癥，主要影響中樞及外周感覺和運動神經(jīng)末梢。病理改變?yōu)檩S突變性、降解或脫落。本文以建立樂果誘導(dǎo)的遲發(fā)性神經(jīng)病的大鼠模型為基礎(chǔ)，觀察其神經(jīng)電生理及形態(tài)學(xué)特點并探討腦苷肌肽結(jié)合甲鈷胺對OPIDN的治療效果。
　　 方法:
　　 1.動物模型的建立:所有SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)。隨機挑選5

2、只大鼠作為正常對照組，其余造模大鼠予一次性腹腔注射樂果乳油，劑量為300mg/kg，染毒后記錄大鼠急性中毒癥并每天觀察大鼠健康情況。在第染毒第3-4周時大鼠出現(xiàn)了步態(tài)蹣跚，重心后移降低，有的后肢完全癱瘓。選取5只癥狀相似的染毒大鼠與正常對照組大鼠分別進行擺尾溫度閾值、神經(jīng)傳導(dǎo)速度、波幅測定，染毒大鼠與正常大鼠各項指標有顯著性差異(P＜0.05）。結(jié)合大鼠體征判斷OPIDN大鼠造模成功。
　　 2.分組及藥物干預(yù):造模成功后，從存

3、活的大鼠中選取出癥狀相似的染毒大鼠隨機分為模型組、甲鈷胺（維生素B12）常規(guī)治療組、結(jié)合治療組（腦苷肌肽結(jié)合甲鈷胺治療），每組20只。常規(guī)治療組大鼠每日以甲鈷胺片0.25mg雙蒸水配制成的溶液灌胃，結(jié)合治療組除上述溶液灌胃，同時加用腦苷肌肽注射液0.25ml每日2次肌肉注射。正常對照組及模型組給予等劑量的雙蒸水灌胃。
　　 3.擺尾溫度閾值測定:藥物治療4周后將各組鼠尾浸入水中約2 cm，當水溫增高而尾擺動并露出水面時記錄水溫，

4、此時水溫為擺尾溫度閾值(TTT)。此項檢測反映了末梢神經(jīng)感覺的靈敏度。
　　 4.神經(jīng)電生理測定:藥物干預(yù)4周后，各組SD大鼠用10％水合氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉，固定于平板上，使用肌電圖誘發(fā)電位儀，采用單極針電極近神經(jīng)法測定各組大鼠尾神經(jīng)電生理指標。方法:將用于刺激的電極陰極置于大鼠尾神經(jīng)的根部遠端，陽極置于近端，兩者距離1 cm;把用于記錄的電極放置在鼠尾尖的近端，使其距離刺激電極的陰極14cm，參考電極于鼠尾尖的遠

5、端放置，距離記錄電極1 cm;在記錄電極和刺激電極之間放置地線，逐步加大刺激的強度(4～8 mA)，記錄最大的神經(jīng)動作電位，并記錄波幅(AMP)及潛伏期(LAT)，根據(jù)公式:運動傳導(dǎo)速度(MCV，m/s)=兩刺激點距離(mm)/潛伏期(ms);感覺傳導(dǎo)速度(SCV，m/s)=刺激點-記錄點距離(mm)/潛伏期(ms)計算出運動神經(jīng)和感覺神經(jīng)的傳導(dǎo)速度。
　　 5.形態(tài)學(xué)檢測:完成神經(jīng)電生理指標測定后，10％水合氯醛腹膜內(nèi)麻醉大鼠

6、，取腓腸肌，4％多聚甲醛固定24 h。0.01 M PBS洗12h，梯度酒精脫水，每步2h，二甲苯透明，常規(guī)光鏡樣品石蠟包埋，切片HE染色后，光學(xué)顯微鏡下觀察肌纖維的變性壞死情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.一般狀況:
　　 大鼠中毒約5分鐘后首先表現(xiàn)為肌束顫動，站立不穩(wěn)，之后可見呼吸急促，口鼻的分泌物增加，爬行不穩(wěn)。當實驗進行到第2周大鼠步態(tài)欠平穩(wěn)明顯顯現(xiàn)出來，表現(xiàn)為肢體活動的減少，后肢力弱。隨時間進展，癥狀越來

7、越明顯，第3-4周時伏地雙足之間距離增大，步態(tài)蹣跚，有些雙腿已支撐不起身體，甚至后肢會完全癱瘓。
　　 2.TTT檢測造模后染毒大鼠TTT(52.15±1.45℃)明顯升高，與正常對照組大鼠(40.12±1.02℃)比較具有顯著性差異(P＜0.05）。常規(guī)治療組、結(jié)合治療組治療4周后，治療組大鼠擺尾溫度閾值均較以前降低，且常規(guī)治療組(48.44±0.60℃)、結(jié)合治療組(45.44±0.81℃)與模型組(50.72±1.19℃)

8、比較具有顯著性差異(P＜0.05），結(jié)合治療組與常規(guī)治療組組間比較具有顯著性差異(P＜0.05）。
　　 3.神經(jīng)電生理檢測造模后染毒組大鼠運動傳導(dǎo)速度(MCV:12.06±0.52 m/s)、及波幅（AMP1.07±0.04 mv）;感覺傳導(dǎo)速度（SCV:15.32±0.37 m/s）及波幅（AMP6.74±0.61μv），與正常組比較（MCV:16.12±0.44 m/s及AMP:2.35±0.05 mv）;（SCV:21.

9、04±0.81 m/s及MP:6.74±0.61μv）均降低(P＜0.05），證實造模成功。
　　 藥物治療4周后，常規(guī)治療組(MCV:14.26±0.35 m/s及AMP:1.71±0.04mv);（SCV:17.48±0.89 m/s及AMP:9.06±0.27μv）;結(jié)合治療組(MCV:15.44±0.48 m/s及AMP:1.83±0.07mv);（SCV:18.28±0.77 m/s及AMP:10.40±0.37μv）

10、與模型組比較(MCV:13.06±0.62m/s及AMP:1.27±0.02mv);（SCV:18.28±0.77 m/s及AMP:10.40±0.37μv），MCV、SCV、AMP均升高，具有顯著性差異(P＜0.05）;常規(guī)治療組、結(jié)合治療組間MCV、SCV、AMP比較，有顯著性差異（P＜0.05）。證實大劑量維生素B12與腦苷肌肽結(jié)合維生素B12治療對OPIDN大鼠周圍神經(jīng)病變MCV、SCV、AMP具有良好的調(diào)整作用，使減慢的運動和

11、感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速度均提高，且腦苷肌肽結(jié)合甲鈷胺組治療效果更為明顯。
　　 4.形態(tài)學(xué)改變
　　 造模后光鏡下可見散在肌纖維萎縮甚至壞死，肌間質(zhì)大量炎性細胞浸潤。治療4周后治療組肌肉變性壞死面積小于模型組，腦苷肌肽結(jié)合治療組變性部分所占面積小于常規(guī)治療組。
　　 結(jié)論:神經(jīng)電生理檢測可確定神經(jīng)損害是否存在，為診斷OPIND的重要指標，為臨床診斷及鑒別診斷治療提供準確的依據(jù);腦苷肌肽結(jié)合甲鈷胺對有機磷中毒遲發(fā)性神經(jīng)病較