miR-26a作為胃癌預(yù)后生物標(biāo)志物初探.pdf

1、背景:胃癌(gastric cancer，GC)是目前世界上發(fā)病率和死亡率分居第五位和第三位的常見惡性腫瘤。近年來，胃癌的全球發(fā)病率和死亡率都呈下降趨勢，但胃癌仍是發(fā)展中國家癌癥相關(guān)死亡的主要原因。在世界范圍內(nèi)，胃癌的男性發(fā)病率是女性的兩倍，且發(fā)病率與死亡率都有顯著的地域差別。在我國，胃癌是排名第三的致死性腫瘤，僅次于肺癌和肝癌。早期胃癌并無明顯癥狀，臨床確診時多為中晚期，從而失去最佳治療時機(jī)。盡管胃癌的診斷手段和治療方案日漸先進(jìn)，但是

2、胃癌患者的預(yù)后仍然不佳。
　　微小RNA（microRNA，miRNA）是在真核生物中發(fā)現(xiàn)的一類內(nèi)源性的具有調(diào)控功能的非編碼蛋白質(zhì)小RNA，參與腫瘤細(xì)胞的生物調(diào)控過程，在腫瘤的診斷和預(yù)后中扮演著重要的角色。大量研究報道m(xù)iRNAs與包括胃癌在內(nèi)的很多種惡性腫瘤的預(yù)后密切相關(guān)。選擇合適的miRNAs作為胃癌的預(yù)后生物標(biāo)志物具有巨大的臨床價值。本實(shí)驗(yàn)室前期通過TaqMan低密度芯片(TaqMan lowdensity array，TL

3、DA)篩選出四個在胃癌血漿中表達(dá)差異明顯的miRNAs（miR-148a、miR-142-3p、miR-26a和miR-195），本研究擬在胃癌患者的組織中檢測出特異性表達(dá)的miRNAs，并將其作為胃癌預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志。
　　方法:本研究通過RT-PCR（實(shí)時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）實(shí)驗(yàn)在一階段南通胃癌石蠟樣本中檢測miR-148a、miR-142-3p、miR-26a和miR-195的表達(dá)水平，篩選出與胃癌預(yù)后相關(guān)的miRNAs，在

4、宜興石蠟樣本中繼續(xù)驗(yàn)證一階段研究結(jié)果。在Pubmed中搜索關(guān)于候選miRNAs、gastric cancer和survival或prognosis有關(guān)的文獻(xiàn)，運(yùn)用STATA11.0等軟件進(jìn)行Meta分析后，再確定進(jìn)行下一步的進(jìn)行功能研究的miRNA。在胃癌細(xì)胞株MGC803、BGC823、SGC7901、MKN28和正常細(xì)胞株GES-1檢測miRNAs本底表達(dá)，選擇表達(dá)最低的細(xì)胞株進(jìn)行功能實(shí)驗(yàn)探索。經(jīng)RT-PCR證實(shí)轉(zhuǎn)染成功后，通過CC

5、K-8（cell counting kit-8，細(xì)胞計數(shù)試劑盒）細(xì)胞增殖試驗(yàn)分析細(xì)胞增殖能力的改變，運(yùn)用平板克隆試驗(yàn)檢測單個細(xì)胞的惡性程度，采用Transwell細(xì)胞遷移侵襲試驗(yàn)檢驗(yàn)細(xì)胞遷移和侵襲能力的變化，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期凋亡的變化。
　　結(jié)果:在一階段南通387例石蠟樣本結(jié)果顯示，miR-26a和miR-148a的表達(dá)水平與預(yù)后顯著相關(guān)，P值分別為0.009和0.005; miR-142-3p和miR-195的表達(dá)水

6、平于預(yù)后無關(guān)，P值分別為0.320和0.119。因此在二階段宜興石蠟樣本中不在驗(yàn)證miR-142-3p和miR-195。miR-26a和miR-148a的表達(dá)水平、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、分化程度與不良預(yù)后均有關(guān)系。多因素Cox回歸模型顯示miR-26a和miR-148a能改善胃癌的預(yù)后（miR-26a: HR=0.76，95％CI=0.61-0.94; miR-148a: HR=0.73，95％CI=0.58-0.91）;另

7、外，TNM分期和化療也與胃癌預(yù)后顯著相關(guān)，P值均＜0.05。
　　鑒于前期已有多篇有關(guān)miR-148a與胃癌研究報道，本研究主要側(cè)重于miR-26a與胃癌預(yù)后相關(guān)的生物學(xué)機(jī)制探討。在胃癌細(xì)胞株MGC803中miR-26a顯著低于正常細(xì)胞GES-1(P＜0.01)。在MGC803細(xì)胞中過表達(dá)miR-26a48h后，增殖能力有明顯下降(P＜0.001);克隆形成率下降了69％(P=0.004);癌細(xì)胞通過小室的遷移率下降了48％(P=

8、0.028);侵襲能力顯著下降(P=0.031)。流式細(xì)胞術(shù)顯示增加細(xì)胞內(nèi)miR-26a表達(dá)，細(xì)胞周期無明顯改變，但細(xì)胞凋亡率明顯增高（P=0.004）。
　　結(jié)論:癌組織中的miR-26a、miR-148a的表達(dá)水平可能與胃癌預(yù)后相關(guān)。腫瘤的TNM分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等均能影響胃癌生存時間。過表達(dá)miR-26a可抑制胃癌的發(fā)生和發(fā)展。我們的研究提示miR-26a的表達(dá)水平可以用來預(yù)測胃癌患者手術(shù)預(yù)后的情況，是潛在的預(yù)后預(yù)測