細胞因子IL-21在原發(fā)性干燥綜合征患者血清中的表達水平及意義.pdf

1、目的:
　　干燥綜合征(Sj(o)gren's syndrome，SS)是以侵犯淚腺、唾液腺等外分泌腺體，具有高度淋巴細胞浸潤為特征，同時伴有外分泌腺組織破壞和自身抗體生成的一類自身免疫病，分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩類，原發(fā)性干燥綜合征（Primary Sj(o)gren's syndrome，pSS）為除外其他潛在自身免疫疾病及結締組織病前提下，主要影響淚腺、唾液腺功能的SS。pSS典型表現(xiàn)為干燥癥狀，通常包括口干燥癥和干燥性角膜炎。

2、其系統(tǒng)損害常累及多個器官，包括腎臟、肺、肝、胰腺、周圍或中樞神經(jīng)系統(tǒng)等。針對SS的治療，目前尚無根治及徹底恢復腺體功能的有效方法，故通常應用支持及對癥治療。對于出現(xiàn)系統(tǒng)損害及嚴重并發(fā)癥（如肺間質病變、血管炎、全血細胞減少等）的患者，可單獨或聯(lián)合應用類固醇激素及免疫抑制劑（細胞毒類藥物）治療，有時也可應用靜注人丙種球蛋白治療。
　　濾泡型輔助性T淋巴細胞(follicular helper T cells，Tfh)是近期發(fā)現(xiàn)的CD4

3、+T細胞亞群，因其定位于濾泡生發(fā)中心而得名。Tfh的特征因子包括轉錄因子Bcl-6，表面分子CXCR5、CD40L、ICOS、PD-1等，及細胞因子IL-21、IL-4、IL-10等。Tfh正是通過上述因子的作用，行使其輔助B淋巴細胞形成GC（germinal center，GC），促進B細胞增殖的功能，使B細胞分化為記憶B細胞和分泌抗體的漿細胞。近些年來，雖針對SS患者血清IL-21水平的研究國內外偶有文獻報道，但上述論著并未從Tfh

4、的角度闡述IL-21在SS發(fā)病方面的可能機制。本課題前期研究顯示，在pSS患者的唇腺組織中，可見大量CXCR5及IL-21陽性細胞浸潤，提示Tfh細胞在SS中具有致病作用。那么SS患者的外周循環(huán)中，Tfh主要效應因子IL-21的表達水平是否增加呢？故本課題通過對比pSS患者與健康對照人群的血清IL-21水平，pSS患者的不同臟器損傷、不同實驗室檢查指標與血清IL-21水平的相關性，探討IL-21的主要來源Tfh與pSS的發(fā)病機制是否存在

5、聯(lián)系，從而為針對IL-21受體的單克隆抗體在SS及其他自身免疫病治療方面的應用提供臨床客觀依據(jù)。
　　材料:
　　實驗對象分為兩部分。①實驗組選取2013年1月至2013年12月在河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院免疫風濕科住院的原發(fā)性干燥綜合征患者血清40例。依受累臟器不同又分為:繼發(fā)肺間質病變組5例，腎小管酸中毒組3例，免疫性血細胞減少組11例，自身免疫性肝病組2例，周圍神經(jīng)病變組2例，無系統(tǒng)損害組17例。入選標準:符合2002年國際

6、pSS分類標準的初診患者，除外其他自身免疫病及風濕病，采血前未接受糖皮質激素和免疫抑制劑治療，既往無器官移植、病毒性肝炎或HIV感染史。②正常對照組選取河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院體檢部健康人群血清30例。入選標準:血常規(guī)、肝腎功能、ESR、CRP及免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)實驗室指標正常，年齡性別分布與實驗組相匹配，采血前兩周內無嚴重的細菌或病毒感染，四周內無疫苗接種史，既往無自身免疫病、器官移植、病毒性肝炎或HIV感染。
　

7、　方法:
　　實驗組各研究對象血清標本為清晨空腹采集，長期置-80℃環(huán)境保存，正常對照組血清標本為實驗前一周內采集，-20℃環(huán)境保存。酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法檢測所有標本中IL-21的水平，魏氏法測定紅細胞沉降率(ESR)，免疫速率散射比濁法測定免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)，對流電泳和免疫雙擴散法測定SSA/Ro抗體與SSB/La抗體(anti-SSA/Ro、anti-SSB/La)。
　　采用SPSS17.

8、0(SPSS Company，Chicago，Illinois，USA)版統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)用(x)±s表示，實驗組與對照組間IL-21水平的比較采用兩個獨立樣本的t檢驗;實驗組內，不同臟器損傷組間IL-21水平的比較，服從正態(tài)分布時采用單因素方差分析，不服從時的組間比較采用多樣本比較的秩和檢驗，血清IL-21水平與患者其他實驗室檢查數(shù)據(jù)間的相關性分析采用直線相關分析，計算pearson相關系數(shù)r，P＜0.05認為其具有統(tǒng)計學意

9、義。
　　結果:
　　1實驗組與對照組一般資料的比較:
　　實驗組內40例pSS患者與正常對照組的30例健康者，其年齡性別分布、患病時間差異均無統(tǒng)計學意義;
　　2實驗組與對照組血清IL-21表達水平比較:
　　與健康對照組血清IL-21水平比較，pSS疾病組患者的血清IL-21表達水平顯著升高;
　　3實驗組中自身抗體陽性組的血清IL-21水平分別與陰性組、對照組比較:
　　抗SSA和（或）抗

10、SSB陽性組血清IL-21水平較自身抗體陰性組升高，且明顯高于健康對照組水平;
　　4實驗組中不同臟器損傷組間IL-21水平比較:
　　合并臟器損傷的患者其血清IL-21水平明顯高于實驗組中無器質性病變的患者;
　　5不同器官損害組與對照組血清IL-21表達水平比較:
　　pSS患者中的不同臟器損傷組血清IL-21表達水平較健康對照組顯著提高，差異具有統(tǒng)計學意義;
　　6實驗組患者血清IL-21水平與ESR

11、、IgG、IgA、IgM參數(shù)間的相關性分析:
　　Pearson相關分析顯示:pSS組患者血清IL-21水平與ESR指標呈正相關(r=0.747，P＜0.01)，與血清IgG水平呈正相關(r=0.871，P＜0.01)，與IgA、IgM兩項指標無明顯相關性。
　　結論:
　　1原發(fā)性干燥綜合征組患者血清中IL-21的表達水平較健康對照組明顯增高，提示:細胞因子IL-21與pSS的發(fā)病機制有關;
　　2 pSS疾病

12、組內合并不同臟器損傷的患者均較無系統(tǒng)損害的患者，其血清IL-21水平顯著提高，提示:外周循環(huán)中高表達的細胞因子IL-21可能參與了pSS系統(tǒng)損傷機制，使之更易出現(xiàn)組織損傷;
　　3 pSS疾病組內，自身抗體陽性組的血清IL-21水平明顯高于自身抗體陰性組，提示:細胞因子IL-21可提高pSS患者自身抗體的生成水平;
　　4 pSS疾病組患者的實驗室指標ESR、IgG與其血清IL-21表達水平呈正相關，提示:細胞因子IL-21