Mcl-1對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的胃腺癌細(xì)胞凋亡敏感性的影響.pdf

1、背景及目的：目前晚期胃腺癌的治療仍未令人滿意。一般認(rèn)為這種情況在很大程度上是由于胃腺癌細(xì)胞對(duì)臨床治療藥物誘導(dǎo)凋亡的抵抗。近期的研究結(jié)果已經(jīng)表明：除了線粒體外，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)也在調(diào)節(jié)化療藥物誘發(fā)的細(xì)胞凋亡中起著重要的作用。這些化療藥物能夠引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和后續(xù)未折疊蛋白反應(yīng)的激活。盡管未折疊蛋白反應(yīng)可通過(guò)減緩內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)而保護(hù)細(xì)胞，過(guò)強(qiáng)或持續(xù)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)的應(yīng)激反應(yīng)可引起以凋亡為主的細(xì)胞死亡。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的胃腺癌細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制尚未確定，但已經(jīng)清楚

2、很多在其它凋亡途徑中有重要作用的分子也參與調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。其中，Bcl-2家族蛋白尤為重要，因?yàn)閮?nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡可以被過(guò)表達(dá)的Bcl-2或其同源性抗凋亡分子所抑制。據(jù)此，本課題組旨在研究Bcl-2家族成員，特別是抗凋亡分子Mcl-1在調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的胃腺癌細(xì)胞凋亡中的作用，以期尋找克服胃腺癌對(duì)化療誘導(dǎo)凋亡不敏感的潛在靶點(diǎn)。
　　 方法：采用誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的天然核苷抗生素衣霉素在不同時(shí)間段處理胃腺癌細(xì)胞株

3、SGC-7901和BGC-823。通過(guò)PI染色法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡率。Western blot 檢測(cè)caspase-8，-9，-3的活化。Western blot 檢測(cè)Bcl-2家族蛋白，包括Bcl-2，Bcl-XL和Mcl-1的表達(dá)。JC-1染色、流式細(xì)胞儀檢測(cè)線粒體膜電位（Δψm）的變化。qRT-PCR檢測(cè)Mcl-1 mRNA表達(dá)。pcDNA3.0/Mcl-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染及siRNA技術(shù)“沉默” Mcl-1基因的表達(dá)，Western b

4、lot分別檢測(cè)Mcl-1轉(zhuǎn)染效率。
　　 結(jié)果：雖然PI染色檢測(cè)結(jié)果，caspase-8，-9，-3的活化以及膜電位的降低都表明衣霉素誘導(dǎo)BGC-823有一定程度的凋亡，而SGC-7901似乎對(duì)衣霉素誘導(dǎo)的凋亡稍不敏感。這可能與衣霉素刺激后的Mcl-1分子表達(dá)的顯著上升有關(guān)，Mcl-1分子的siRNA敲除實(shí)驗(yàn)促凋亡及Mcl-1過(guò)表達(dá)的抗凋亡結(jié)果都表明Mcl-1在保護(hù)細(xì)胞抗衣霉素誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中起著重要的作用。相反，衣霉素的處理不

5、會(huì)引發(fā)Bcl-2和 Bcl-XL表達(dá)的顯著改變。衣霉素作用SGC-7901細(xì)胞Mcl-1分子的上調(diào)和Mcl-1在mRNA水平的升高有關(guān)，表明其中還可能涉及到它的轉(zhuǎn)錄機(jī)制。
　　 結(jié)論：體外培養(yǎng)的人胃腺癌細(xì)胞對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡敏感性的變化和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀況下Mcl-1的表達(dá)水平相關(guān)。胃腺癌細(xì)胞在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激下Mcl-1表達(dá)水平的升高能夠阻礙其誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。因此，在胃腺癌的藥物治療能引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的情況下，Mcl-1的靶點(diǎn)治療