TAK1siRNA對類風濕性關(guān)節(jié)炎患者滑膜細胞MMP1和TNF-a表達的影響.pdf

1、材料與方法:
　　一、實驗材料
　　1、12例標本來源:中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院骨外科住院手術(shù)患者（住院時間2012年11月-2013年2月）。以上手術(shù)患者診斷都符合美國風濕病學會1987年提出的RA診斷標準，術(shù)前均已經(jīng)過倫理學認證通過。
　　2、免疫組化染色試劑盒
　　3、DharmaFECT siRNA轉(zhuǎn)染試劑盒
　　4.ELISA試劑盒
　　二、實驗方法
　　1、細胞培養(yǎng)
　　RA患

2、者滑膜細胞進行培養(yǎng)，用于實驗或傳代。
　　2、細胞鑒定
　　將培養(yǎng)至三代的滑膜細胞進行免疫組化鑒定:
　　(1)取貼滿細胞的蓋玻片，用10％甲醛溶液固定30min，晾干，
　　(2)用PBS沖洗三次，再加入3％H2O25-10min，PBS沖洗，再加入正常善養(yǎng)血清，于室溫靜置10-15min，傾去，勿洗，甩干后，加一抗過夜，
　　(3)滴加辣根過氧化物酶，于室溫孵育10min，PBS沖沈3x3min，用DA

3、B顯色，當顯色完全后復(fù)染，脫水，封片。
　　3、細胞轉(zhuǎn)染
　　嚴格按照試劑說明書規(guī)定，將滑膜細胞隨機分組后，進行細胞轉(zhuǎn)染。
　　4、ELISA檢測
　　5、統(tǒng)計學分析
　　實驗結(jié)果:
　　本研究發(fā)現(xiàn):運用轉(zhuǎn)染技術(shù)抑制轉(zhuǎn)化生長因子β激活激酶（TAK1）在類風濕關(guān)節(jié)炎滑膜細胞中的表達后，可發(fā)現(xiàn)MMP1和TNF-a的表達有不同程度的降低。
　　結(jié)論:
　　在類風濕關(guān)節(jié)炎患者滑膜細胞中轉(zhuǎn)染TAK1