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文檔簡介
1、類風濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種慢性進行性自身免疫性疾病,以關(guān)節(jié)滑膜炎及對稱性關(guān)節(jié)骨、軟骨破壞為主要特征。類風濕性關(guān)節(jié)炎的病因尚不清楚,但我們已經(jīng)明確它的發(fā)生與免疫異常有關(guān),多種炎性細胞因子在發(fā)病過程中起著極為重要的作用。這些細胞因子通過信號轉(zhuǎn)導途徑的級聯(lián)放大作用,導致蛋白酶、生長因子和許多與炎癥過程相關(guān)化合物的含量變化。參與類風濕性關(guān)節(jié)炎發(fā)病的細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導途徑種類繁多、錯綜復(fù)雜,其中兩種途徑發(fā)揮
2、重要作用:絲裂原活性蛋白激酶(MAPKs)途徑和核因子-κB(NF-κB)途徑。 轉(zhuǎn)化生長因子β激活激酶(TAK1,MEKK7)是MAP3K家族的成員之一,能被多種細胞因子包括IL-1β,IL-18,TNF-α等激活,處于這兩條途徑的分支點上。TAK1作為炎癥反應(yīng)中細胞信號傳導上游重要的激酶,可能對類風濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病起著重要的調(diào)節(jié)作用。目前已有研究表明在骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細胞中TAK1-定規(guī)模的表達,并且阻遏TAK1基因可以使其下
3、游炎性因子表達減少。 本實驗采用病例對照研究分別檢測類風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、骨性關(guān)節(jié)炎(OA)及非關(guān)節(jié)炎病人膝關(guān)節(jié)滑膜中TAK1基因mRNA和蛋白的表達,并比較其活性差異,以驗證TAK1與類風濕性關(guān)節(jié)炎發(fā)病的相關(guān)性,為進一步從分子水平深入探討類風濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機制奠定基礎(chǔ),為臨床上治療類風濕性關(guān)節(jié)炎提供新靶點。 材料與方法: 一、實驗材料 1、23例膝關(guān)節(jié)滑膜組織標本來源于中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院骨科住
4、院患者。其中10例為類風濕性關(guān)節(jié)炎患者,7例為骨性關(guān)節(jié)炎患者,6例為行膝關(guān)節(jié)鏡探查術(shù)未見異常的病人。 2、RT-PCR反轉(zhuǎn)錄試劑盒。 3、Western印跡雜交相關(guān)試劑。 二、實驗方法 1、RT-RCR實驗對病例組及對照組TAK1基因mRNA表達進行檢測。 2、Western印跡雜交檢測病例組及對照組TAK1蛋白的表達水平。 3、Western印跡雜交方法檢測病例組及對照組TAK1激酶活性
5、差異。 結(jié)果: 1、RT-PCR的結(jié)果提示TAK1mRNA在類風濕性關(guān)節(jié)炎病人膝關(guān)節(jié)滑膜中有明顯的表達;在行膝關(guān)節(jié)鏡探查術(shù)未見異常的病人滑膜組織中表達最低,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 2、Western印跡雜交表明TAK1蛋白在類風濕性關(guān)節(jié)炎病人膝關(guān)節(jié)滑膜中有明顯的表達;在行膝關(guān)節(jié)鏡探查術(shù)未見異常的病人滑膜組織中表達最低,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 3、以磷酸化抗體行Western印跡雜交提示,在
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