外源性miRNA-206在肝癌中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、分類號：密級：UDC：學(xué)號：406504711022南昌大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文外源性外源性miRNA206在肝癌中的作用及其機(jī)制研究在肝癌中的作用及其機(jī)制研究StudiesonthefunctionprobableunderlyingmechanismofmiRNA206ectopicoverexpressioninhumanhepatocellularcarcinoma劉偉偉劉偉偉培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：

2、萬福生教授申請學(xué)位的學(xué)科門類：理學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱：生物化學(xué)與分子生物學(xué)論文答辯日期：2014年月日答辯委員會主席：評閱人：2014年月摘要II摘要micrNA206(miR206)是肌源性miRNAs（myomiRs）miR1家族中的一員，早期的研究表明miR206作為肌特異性miRNA參與肌肉的生成。然而，近些年的研究表明miR206與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，主要參與細(xì)胞生長、增殖、凋亡以及細(xì)胞遷移等的調(diào)控，可作為一種腫瘤抑制基因。

3、有研究表明miR206可靶向作用于Notch3是其抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制之一。目的：目的：從分子和細(xì)胞水平探討miR206在肝癌中的作用及其部分的分子機(jī)制，旨在為腫瘤的基因治療進(jìn)行一些有益的嘗試并提供有參考意義的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。方法：方法：1、利用免疫組織化學(xué)技術(shù)初步檢測Notch3在肝癌及其癌旁的相對表達(dá)情況。2、高表達(dá)miR206對人肝癌細(xì)胞HepG2作用的體外實(shí)驗(yàn)研究脂質(zhì)體介導(dǎo)將miRNA206mimic轉(zhuǎn)染人肝癌HepG2細(xì)胞，分

4、別應(yīng)用MTS檢測細(xì)胞增殖活性，Hoechst33342染色和AnnexinVFITCPIassay檢測細(xì)胞凋亡、流式分析檢測細(xì)胞周期分布，傷口愈合實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞遷移情況。利用RTqPCR分析miRNA206、Notch3、Bax、Bcl2、Hes1、P57和MMP9基因表達(dá)水平，利用Westernblotting分析Notch3、Bax、Bcl2、Caspase3、Hes1、P57和MMP9的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：結(jié)果：1、高表達(dá)miR20

5、6可以抑制人肝癌HepG2細(xì)胞增殖和促進(jìn)人肝癌HepG2細(xì)胞凋亡；2、高表達(dá)miR206可誘導(dǎo)人肝癌HepG2細(xì)胞周期阻滯和抑制細(xì)胞遷移；3、miR206mimic被成功的轉(zhuǎn)染到HepG2細(xì)胞后，Notch3、Hes1、Bcl2和MMP9的mRNA和蛋白水平顯著下調(diào)而P57和Bax被上調(diào)?；罨偷腃aspase3蛋白表達(dá)水平也明顯上調(diào)4、Notch3在肝癌癌旁組織呈微弱的低表達(dá)，而在癌組織呈強(qiáng)陽性表達(dá)5、miR206在體外抑制肝癌細(xì)胞的