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文檔簡(jiǎn)介
1、多環(huán)芳烴類(lèi)化合物(Polycyclic Aromatic Hydrocarbon,PAHS)是由煤,石油,木材,煙草,有機(jī)高分子化合物等有機(jī)物不完全燃燒產(chǎn)生的,廣泛存在于環(huán)境中的重要的環(huán)境和職業(yè)污染物,其重要成分苯并[a]芘(Benzo[a]pyrene,B[a]P)為確認(rèn)致癌物。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)B[a]P不僅具有致癌性,其神經(jīng)毒性也逐漸引起學(xué)者重視。試驗(yàn)研究表明,B[a]P可導(dǎo)致動(dòng)物神經(jīng)組織損傷,空間學(xué)習(xí)記憶能力下降,其作用與血漿和腦內(nèi)
2、B[a]P代謝產(chǎn)物濃度顯著相關(guān)。在學(xué)習(xí)記憶過(guò)程中,膽堿能系統(tǒng)發(fā)揮著重要作用。乙酰膽堿(Acetylcholine,Ach),作為一種重要的神經(jīng)遞質(zhì),與學(xué)習(xí)、記憶等認(rèn)知功能有關(guān)。但B[a]P誘發(fā)的神經(jīng)毒性是否與膽堿能系統(tǒng)有關(guān),目前尚不清楚。本研究擬通過(guò)亞慢性染毒B[a]P大鼠模型,觀察B[a]P對(duì)大鼠海馬組織Ach含量、膽堿酯酶(Acetylcholineesterase,AchE)活性和乙酰膽堿受體α7亞型(Nicotinic acet
3、ylcholine receptorα7 subtype,nAChRα7)基因和蛋白表達(dá)水平的影響及與B[a]P導(dǎo)致大鼠學(xué)習(xí)記憶功能損傷的關(guān)系,從而探討膽堿能系統(tǒng)在B[a]P神經(jīng)毒性機(jī)制中的作用。
目的:
通過(guò)觀察亞慢性染毒B[a]P對(duì)大鼠神經(jīng)行為的影響,以及對(duì)大鼠外周血及海馬組織中乙酰膽堿含量、膽堿酯酶活性和海馬組織中乙酰膽堿受體α7亞基(nAChRα7)mRNA和蛋白的表達(dá)的影響,探討苯并[a]芘的神經(jīng)毒
4、性機(jī)制。
方法:
選擇50只健康雄性SD大鼠,隨機(jī)分為空白對(duì)照組,溶劑對(duì)照組,1.0、2.5、6.25mg/kg·KW B[a]P染毒組,隔日腹腔注射染毒90天。Morris水迷宮和跳臺(tái)試驗(yàn)檢測(cè)大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力。堿性羥胺法檢測(cè)外周血和海馬組織Ach含量。DNTB法檢測(cè)外周血和海馬組織AChE活性。熒光定量PCR法和Western-blot法分別檢測(cè)大鼠海馬組織nAChRα7mRNA和蛋白表達(dá)水平。
5、 結(jié)果:
Morris水迷宮試驗(yàn)結(jié)果顯示,B[a]P染毒組大鼠出現(xiàn)平均逃避潛伏期和平均總路程均隨著染毒劑量的增加而增大,平臺(tái)象限停滯時(shí)間隨著染毒劑量的增加而減小的趨勢(shì)。6.25mg/kgB[a]P組尋找平臺(tái)的平均逃避潛伏期為為46.77±2.14s,顯著高于空白對(duì)照、溶劑對(duì)照和1.0mg/kg B[a]P組(17.38±1.82s,25.12±1.95s和22.91±1.86s,P<0.05)。6.25mg/kgB[
6、a]P組大鼠平臺(tái)象限停滯時(shí)間為24.68±15.33s,顯著低于空白對(duì)照、溶劑對(duì)照、1.0mg/kg和2.5mg/kgB[a]P組(48.37±10.6s,41.49±11.44s,43.15±10.24s和38.92±13.31s,P<0.05),其他各組之間差異無(wú)顯著性差異;2.5mg/kg、6.25mg/kgB[a]P組大鼠平均總路程分別為158.59±1.86cm、181.97±2.09cm,顯著大于空白對(duì)照、溶劑對(duì)照和1.0m
7、g/kg B[a]P組(87.10±1.95cm,117.49±1.91cm和97.72±2.04cm,P<0.05)。
跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,6.25mg/kgB[a]P染毒組大鼠的第一次錯(cuò)誤次數(shù)(EN1)為3.30±1.16次,顯著高于空白對(duì)照、溶劑對(duì)照和1.0mg/kgB[a]P組(1.14±0.69次、1.10±0.74次和1.23±0.44次),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);2.5mg/kg、6.25mg/kgB
8、[a]P組大鼠逃避潛伏期(LT)分別為34.02±8.16s、23.67±8.63s,顯著小于空白對(duì)照、溶劑對(duì)照和1.0mg/kgB[a]P組(分別為71.34±35.67s、73.01±24.82s和60.71±17.8ls),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);6.25mg/kgB[a]P組大鼠第二次錯(cuò)誤次數(shù)(EN2)為2.21±0.67次,顯著高于空白對(duì)照、溶劑對(duì)照、1.0mg/kgB[a]P和2.5mg/kgB[a]P組(分別為1
9、.00±0.58次、1.10±0.32次、1.31±0.85次和1.23±0.83次),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
各組大鼠外周血Ach差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);2.5mg/kg、6.25mg/kgB[a]P組大鼠外周血AchE活性分別為14.3±6.68和12.3±4.96U/ml,顯著低于空白對(duì)照組(17.9±5.92U/ml)和溶劑對(duì)照組(17.2±4.84),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。大鼠腦
10、海馬組織Ach含量有隨染毒劑量升高而降低的趨勢(shì),其中2.5mg/kg和6.25mg/kgB[a]P組大鼠Ach含量(43.4±26.8和34.9±12.3μg/ml)顯著低于空白對(duì)照、溶劑對(duì)照和1.0mg/kgB[a]P組(60.8±6.46、55.6±16.9和53.7±17.8μg/ml),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。6.25mg/kgB[a]P組大鼠腦海馬組織AchE活性為3.01±1.32U/ml,顯著低于空白對(duì)照、溶劑對(duì)
11、照、1.0mg/kg和2.5mg/kgB[a]P組(5.32±1.66、5.12±1.62、5.37±1.68和5.23±1.02U/ml),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
Western-blot法和熒光定量PCR法測(cè)定結(jié)果顯示,各組大鼠海馬組織中nAChRα7蛋白表達(dá)水平和nAChRα7mRNA差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
結(jié)論:
1、亞慢性染毒B[a]P可損傷大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力
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