黃芪注射液對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖及分泌粘附分子VCAM-1和E-selectin的研究.pdf

1、目的 了解黃芪注射液對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖及分泌粘附分子VCAM-1和E-selectin的影響，探討黃芪注射液對(duì)造血調(diào)控的機(jī)理。 方法 (1)．建立人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)模型，用免疫細(xì)胞化學(xué)方法及電子顯微鏡技術(shù)鑒定內(nèi)皮細(xì)胞；(2)．將HUVEC與黃芪注射液不同劑量(0μg/mL、4μg/mL、40μg/mL、400μg/mL和4000μg/mL)一起培養(yǎng)，用MTr檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞增殖；以流式細(xì)胞分析術(shù)測(cè)定內(nèi)皮細(xì)胞增殖周期

2、；以TNF作為陽(yáng)性對(duì)照，用ELISA法對(duì)粘附分子VCAM-1和E-selectin進(jìn)行測(cè)定。 結(jié)果 (1)成功的建立了人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的體外模型；用Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果為陽(yáng)性、電鏡檢測(cè)到W-P小體，證實(shí)培養(yǎng)細(xì)胞為人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞。(2)內(nèi)皮細(xì)胞隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，各組均顯示出不同程度的促生長(zhǎng)效應(yīng)(Time：P<0.05；Concentration：P<0.05)。(3)細(xì)胞周期檢測(cè)顯示實(shí)驗(yàn)組內(nèi)皮細(xì)胞周期各時(shí)

3、相的細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的百分比與黃芪組比較有明顯的不同(P<0.05)。S期和G<,2>/M期細(xì)胞顯著增多(P<0.05)，而G<,0>/G<,1>期細(xì)胞相對(duì)比例減少(P<0.05)。(4)體外培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞可自然分泌VCAM-1。各個(gè)濃度的黃芪注射液與TNF一樣均具有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分泌VCAM-1的作用，其中400μg/mL的黃芪注射液濃度是促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分泌VCAM-1的最佳濃度(P<0.05)，而且黃芪注射液具有協(xié)同tNF的作用(P<0

4、.05)。(5)內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)在沒有任何刺激的情況下未檢測(cè)到E-selectin。黃芪注射液刺激內(nèi)皮細(xì)胞也未檢測(cè)到E-selectin。內(nèi)皮細(xì)胞在TNF刺激活化后表達(dá)E-seleetin。黃芪注射液能促進(jìn)TNF活化的內(nèi)皮細(xì)胞分泌E-se-lectin(P<0.05)。 結(jié)論 本研究提示，黃芪的補(bǔ)氣生血途徑之一可能是通過直接刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖和分泌造血生長(zhǎng)因子和粘附分子，從而間接發(fā)揮造血調(diào)控作用的；黃芪可能促進(jìn)造血干祖細(xì)胞