硼替佐米致周圍神經(jīng)病變的機制及還原型谷胱甘肽逆轉神經(jīng)毒性的研究.pdf

1、目的: 硼替佐米(商品名：萬珂)用于多發(fā)性骨髓瘤的治療，在臨床上取得了良好的療效，但其產(chǎn)生的周圍神經(jīng)病變，常降低病人的生活質量。因此，針對硼替佐米產(chǎn)生周圍神經(jīng)系統(tǒng)毒性的機制，以及逆轉神經(jīng)毒性途徑的研究顯得尤為重要。 本實驗通過動物模型研究硼替佐米致周圍神經(jīng)病變的機制，探討活性氧在神經(jīng)細胞線粒體、內(nèi)質網(wǎng)內(nèi)釋放，進而導致神經(jīng)細胞凋亡過程中的作用，以及還原型谷胱甘肽是否能夠通過清除活性氧達到預防和逆轉周圍神經(jīng)病變的作用。

2、 對象和方法: 一、實驗對象 以18只雌性成年Wistar大鼠為研究對象，隨機分成三組： 組1：硼替佐米組(Btzm)； 組2：硼替佐米合用還原型谷胱甘肽組(B+GSH)； 組3：鹽水對照組(NS)。 二、實驗材料 1、實驗藥品 硼替佐米(萬珂/Velcade)：美國Millennium公司；還原型谷胱甘肽(古拉定)：意大利Laboratorio Farmaceutico

3、公司。 2、實驗試劑 DCFH—DA(Sigma—Aldrich公司)；培養(yǎng)基：DMEM、NeurobasalTM—A培養(yǎng)液(Invitrogen公司)；0.25％胰蛋白酶(Invitrogen公司)、15％胎牛血清(Sigma—Aldrich公司)；B—27、L—谷氨酰胺(Invitrogen公司)，poly—L—lysine(Sigma—Aldrich公司)。 3、實驗器材 Nikon ECLIP

4、SE E800光鏡(盛京醫(yī)院中心實驗室)、JEM—1200EX透射電鏡(中國醫(yī)大第二電鏡室)、Nikon ACA S570激光共聚焦顯微鏡(盛京醫(yī)院中心實驗室)。 三、實驗方法 三組大鼠分別于第1，4，8，11日給藥，治療結束后，處死一半數(shù)量的大鼠，剩余大鼠繼續(xù)飼養(yǎng)觀察3周后處死。用斷頸法處死大鼠，分別取各組大鼠的左側坐骨神經(jīng)，以及L4—L5的背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion，DRG)，分別用光鏡和電

5、鏡觀察標本的神經(jīng)病理學改變。培養(yǎng)大鼠DRG，用2’，7’—二氯熒光素二脂(2’，7’—dichlorofluorescin—diacetate，DCFH—DA)標記檢測活性氧(reactive oxygen species，ROS)。使用共聚焦激光顯微鏡(Ex：488nm；Em：530nm)分別計算50個細胞的平均象素強度，檢測ROS的釋放情況。 實驗結果: 1、大鼠經(jīng)硼替佐米處理后，出現(xiàn)明顯的全身中毒癥狀，包括少動、厭

6、食、消瘦等，但合用還原性谷胱甘肽后，全身中毒癥狀減輕。 2、電鏡下硼替佐米處理后的大鼠坐骨神經(jīng)施萬細胞和髓鞘有明顯的形態(tài)學改變，停藥后形態(tài)學改變恢復正常。經(jīng)還原型谷胱甘肽處理后，神經(jīng)損傷較未經(jīng)處理的硼替佐米組略有減輕，但仍然存在 3、經(jīng)硼替佐米處理后的大鼠DRG神經(jīng)元ROS的釋放明顯增加，而合用還原型谷胱甘肽組及鹽水處理組ROS釋放則明顯減少。 結論: 硼替佐米可產(chǎn)生明顯的全身中毒癥狀；硼替佐米合用還原型