SQSTM1-p62在肝癌缺氧、營(yíng)養(yǎng)缺乏微環(huán)境中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文SQSTM1p62在肝癌缺氧、營(yíng)養(yǎng)缺乏微環(huán)境中的作用及機(jī)制研究姓名：顧澄宇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：樊嘉201204復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要第一部分SQSTMl／p62在人肝癌細(xì)胞系和肝癌組織中的表達(dá)情況研究本部分旨在研究p62在人正常肝細(xì)胞系、肝癌細(xì)胞系和肝癌組織的表達(dá)情況，初步探討p62與自噬相關(guān)基因At95和Beclinl之間的關(guān)系。選用正常肝細(xì)胞系L02和常見(jiàn)的肝癌細(xì)胞系Hep3B、HepG

2、2、Huh7、SMMC7721、MHCC97L、MHCC97一H和HCCLM3共7種不同的人肝癌細(xì)胞系，通過(guò)RealtimePCR、Westernblot方法檢測(cè)上述細(xì)胞系中p62、At95和Beclin1的mRNA和蛋白表達(dá)情況；采用免疫熒光方法，觀察Huh7、SMMC7721、MHCC97H和HCCLM3四個(gè)細(xì)胞系中p62蛋白的表達(dá)分布情況。應(yīng)用免疫組化方法觀察p62在人肝癌組織及癌旁組織中的表達(dá)情況，在腫瘤和癌旁組織(距離腫瘤2c

3、m)的配對(duì)樣品中檢測(cè)p62、At95和Beclinl的mRNA表達(dá)水平，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。通過(guò)構(gòu)建穩(wěn)定敲減Beclin1的SMMC7721和MHCC97H細(xì)胞株，觀察在基礎(chǔ)自噬水平抑制的情況下p62蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，p62mRNA和蛋白在各肝癌細(xì)胞系中均有表達(dá)，與L02比較具有顯著性差異(P2cm)中的表達(dá)水平。研究表明，在基礎(chǔ)自噬水平較高的細(xì)胞系中p62的表達(dá)水平普遍較低，而基礎(chǔ)自噬水平較低的細(xì)胞系中p62高水平表達(dá)。抑制自噬，