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文檔簡介
1、第一部分、以形態(tài)與組織學為基礎篩選誘導胎鼠腭裂的TCDD最適劑量
目的:觀察在飼服不同四氯二苯二噁英(TCDD)劑量的作用下,胎鼠腭裂形成過程中的形態(tài)及組織學變化,以篩選TCDD誘導胎鼠腭裂模型的最適劑量。
方法:C57BL/6J孕鼠隨機分為對照組和實驗Ⅰ~Ⅳ組,每組6只;妊娠第10天,對照組以玉米油0.1ml灌胃,實驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組分別以TCDD32、28、24、20μg/kg灌胃。妊娠第17.5天處死孕鼠,稱量
2、孕鼠及胚胎體重,記錄活胎鼠數、腭裂數、吸收胎及死胎鼠數。另取15只C57BL/6J孕鼠隨機分組同前,處理方法同前;各組分別于妊娠第13.5、14.5和15.5天剪取胎鼠頭部,解剖顯微鏡下觀察;并行蘇木精-伊紅染色,觀察。
結果:實驗各組與對照組孕鼠增加的體重及活胎鼠體重的差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。實驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組較對照組雙側腭突發(fā)育瘦小,上抬延遲;實驗Ⅳ組雙側腭突發(fā)育及上抬與對照組相比無明顯差異。實驗Ⅰ~Ⅳ組胎鼠腭裂
3、發(fā)生率分別為97.37%、93.02%、65.12%、56.82%,對照組未見胎鼠腭裂形成。
結論:TCDD28μg/kg是建立C57BL/6J胎鼠腭裂模型的最適劑量。
第二部分、葉酸、白藜蘆醇和α-萘黃酮對TCDD致胎鼠腭裂的拮抗作用研究
目的:進一步探討葉酸、白藜蘆醇和α-萘黃酮預防TCDD致胎鼠腭裂發(fā)生的作用并比較三種藥物的效果。
方法:將孕鼠隨機分為11組,每組8只。TCDD組于GD10以
4、TCDD28μg/kg灌胃。葉酸處理孕鼠分3組:分別于GD10以葉酸15、10、5 mg/kg+TCDD28μg/kg灌胃。α-萘黃酮處理孕鼠分2組:分別于GD10以α-萘黃酮5mg/kg、50μg/kg+TCDD28μg/kg灌胃;對照組以玉米油0.1 ml灌胃。白藜蘆醇處理孕鼠分3組:GD8~13組,以50 mg/kg白藜蘆醇于GD8~13灌胃6次;白藜蘆醇GD8~13+TCDD組,以白藜蘆醇50 mg/kg于GD8~13灌胃6次,
5、TCDD28μg/kg于GD10灌胃1次;白藜蘆醇GD10+TCDD組,以白藜蘆醇50 mg/kg及TCDD28μg/kg于GD10灌胃;設對照組以等量羧甲基纖維素鈉溶液于GD8~13灌胃及玉米油0.1ml于GD10灌胃。GD17.5處死孕鼠,稱量孕鼠及胚胎體重,記錄活胎鼠數、腭裂數、吸收胎及死胎鼠數;并剪取胎鼠頭部,解剖顯微鏡下觀察。
結果:TCDD28μg/kg所致胎鼠腭裂發(fā)生率為92.86%,對照組未見胎鼠腭裂形成。TC
6、CD+葉酸15、10、5 mg/kg3組致胎鼠腭裂發(fā)生率分別為84.00%、73.08%、86.00%。TCCD+α-萘黃酮5mg/kg、50μg/kg2組致胎鼠腭裂發(fā)生率分別為65.52%、74.00%。白藜蘆醇GD8~13、GD8~13+TCDD組、GD10+TCDD3組致胎鼠腭裂發(fā)生率分別為0.00%、57.78%、74.51%。白藜蘆醇GD8~13+TCDD組孕鼠每窩活胎數、死胎和吸收胎數,與對照組及TCDD組相比,差異均有統(tǒng)計
7、學意義(P<0.05);其余各實驗組孕鼠體重增加量、活胎鼠體重及每窩平均胎數、每窩活胎數與對照組相比,差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
結論:試驗劑量的葉酸、白藜蘆醇和α-萘黃酮均有一定的拮抗TCDD誘導胎鼠腭裂發(fā)生的作用,以葉酸10 mg/kg、白藜蘆醇50 mg/kg(GD10一次飼服)、α-萘黃酮5mg/kg劑量的拮抗作用較強,三者作用效果無明顯差異。
第三部分、胎鼠腭突掃描電鏡觀察及Rho GDI蛋白的檢
8、測
目的:觀察TCDD、葉酸、白藜蘆醇和α-萘黃酮作用于孕鼠后對胎鼠腭突表面超微結構及腭突組織中Rho GDI蛋白表達的影響。
方法:孕鼠隨機分組,每組3只。GD10,TCDD組以TCDD28μg/kg灌胃,對照組以玉米油0.1 ml灌胃;葉酸組以葉酸10 mg/kg+TCDD28μg/kg灌胃;白藜蘆醇組以白藜蘆醇50 mg/kg+TCDD28μg/kg灌胃;α-萘黃酮組以α-萘黃酮5 mg/kg+TCDD28μg
9、/kg灌胃。分別于GD13.5、14.5和15.5剪取胎鼠頭部,掃描電鏡觀察腭突表面超微結構;免疫組化檢測GD17.5胎鼠腭突組織中Rho GDI蛋白的表達。
結果:TCDD組腭中嵴上皮細胞表面逐漸破裂、皺縮,偽足結構逐漸減少、消失,最終形成腭裂;對照組、葉酸組、白藜蘆醇組和α-萘黃酮組腭中嵴上皮細胞表面光滑整齊、飽滿膨脹,表面絲狀偽足逐漸增多、延長,一直持續(xù)到腭突融合結束。免疫組化結果顯示,Rho GDI蛋白在對照組胎鼠腭突
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