多孔絲素材料修復(fù)大鼠真皮缺損過程中成纖維細(xì)胞CD90表達(dá)及其生物學(xué)特性.pdf

1、目的：為深入研究絲素蛋白在修復(fù)大鼠皮膚缺損過程中的作用機理，用免疫組織化學(xué)方法分別檢測CD90、’FGF-β1、α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型膠原在天蠶絲素材料、家蠶絲素材料和海綿材料修復(fù)大鼠皮膚缺損過程中的表達(dá)水平，探討材料對主要修復(fù)細(xì)胞的影響，分析成纖維細(xì)胞CD90表達(dá)及其增殖、合成、收縮等功能的相關(guān)性。
　　 方法：1、雄性SD清潔級大鼠144只，隨機分為3組。A組為天蠶絲素材料組，n=48；B組為家蠶絲素材料組，n=48；C組為海

2、綿材料組，n=48；應(yīng)用3組材料復(fù)合大鼠自體刃厚皮片修復(fù)大鼠背部皮膚缺損（2cm×2cm）。分別在術(shù)后5d、10d、15d和25d各組取材，標(biāo)本固定，石蠟包埋，組織切片，HE染色。2、根據(jù)HE染色結(jié)果確定取材部位，每個組織蠟塊中選取1個采樣點，不同時間點分別構(gòu)建4塊組織芯片蠟塊，陣列均為6×6。每塊芯片包含同一時間點的36點組織標(biāo)本。3、組織芯片行免疫組織化學(xué)染色，檢測CD90、TGF-β1、α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型膠原在不同時間點各組材料

3、修復(fù)大鼠皮膚缺損過程中的表達(dá)水平，將所得結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析。4、分析成纖維細(xì)胞CD90表達(dá)與TGF-β1/α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型膠原4種蛋白表達(dá)的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：1、移植術(shù)后A、B兩組復(fù)合皮片生長良好、全部存活；C組移植皮片大部分變黑、結(jié)痂，并有脫落。2、成功構(gòu)建絲素蛋白材料修復(fù)大鼠皮膚缺損實驗的組織芯片，用于免疫組化染色。3、免疫組織化學(xué)染色顯示術(shù)后第10d、15d時A、B兩組CD90陽性成纖維細(xì)胞表達(dá)較多，25d時有所下

4、降，A、B兩組相比無顯著意義（P>0.05）；與C組相比較差異均有顯著意義（P<0.05）。4、TGFβ1和α-SMA在A、B兩組中術(shù)后5d少量表達(dá)，而在第10d、15d時TGF-β1、α-SMA均有較高程度表達(dá)，25d時表達(dá)降低，兩者相比無顯著意義（P>0.05），兩者與C組相比較均有非常顯著意義（P<0.05）。5、術(shù)后25d時A、B兩組中Ⅰ、Ⅲ膠原表達(dá)較多，兩者比較均無顯著意義（P>0.05），與C組比較有顯著意義（P<0.05）

5、。6、統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn)A、B兩組中成纖維細(xì)胞CD90表達(dá)和TGF-β1、α-SMA表達(dá)具有相關(guān)性。
　　 結(jié)論：1、天蠶絲素和家蠶絲素作為真皮支架材料沒有明顯差別，移植后局部炎性反應(yīng)均較輕，具有良好的組織相容性，都可用作真皮缺損的修復(fù)材料。2、組織芯片具有效率高、質(zhì)控好的優(yōu)點，適合多因素比較研究，可用于修復(fù)大鼠真皮缺損的相關(guān)實驗研究。3、絲素蛋白支架材料作為真皮模板早期能誘導(dǎo)創(chuàng)面周圍和基底的成纖維細(xì)胞長入，后期可使CD90陽性成纖