HBsAg陽性孕婦胎盤組織HBV cccDNA檢測及臨床意義研究.pdf

1、目的：乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，HBV)主要通過母嬰垂直傳播引起，其中宮內(nèi)感染是最主要的傳播途徑，是造成免疫預(yù)防失敗的主要原因。本實驗將通過一種新型的原位檢測方法，檢測HBsAg陽性孕婦胎盤組織中HBVcccDNA存在情況，進一步探討其意義及乙型肝炎病毒母嬰傳播機制，研究其與宮內(nèi)感染發(fā)生的關(guān)系。
　　方法：以52例北京302醫(yī)院婦產(chǎn)中心進行產(chǎn)檢并分娩的HBsAg陽性的孕婦產(chǎn)婦胎盤組織作為實驗組，5例乙型肝炎

2、病毒五項標(biāo)志物均為陰性的健康孕婦的胎盤組織作為陰性對照組，同時以HBsAg與HBcAg均陽性的肝癌肝穿樣本作為陽性對照組。收集孕婦及其新生兒臨床資料，胎兒娩出后30min內(nèi)于臍帶中央切取2.0cm×2.0cm×1.5cm大小的胎盤組織，立即置于10％中性福爾馬林中固定，經(jīng)梯度酒精脫水、石蠟包埋、4.5μm連續(xù)切片后使用。Envision免疫組織化學(xué)染色方法檢測石蠟包埋胎盤組織各類細(xì)胞中HBsAg、HBcAg表達情況;原位聚合酶鏈反應(yīng)方法

3、(in situ polymerase chain reaction，IS-PCR)檢測胎盤組織中HBV cccDNA表達情況。每次實驗均設(shè)立陰性對照組與陽性對照組。以新生兒出生后24h內(nèi)股靜脈血中HBsAg、 HBeAg或HBV DNA任一項為陽性作為新生兒發(fā)生宮內(nèi)感染的標(biāo)志。
　　結(jié)果：⑴52例HBsAg陽性孕婦中，共有21例新生兒發(fā)生宮內(nèi)感染，總的感染率為40.38％(21/52)。大三陽組孕婦新生兒HBV感染率為89.47

4、％(17/19)，高于小三陽組孕婦12.12％(4/33)，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。HBVDNA高載量組(104～109IU/ml)與低載量組(102～104 IU/ml)新生兒HBV感染率分別為77.78％(14/18)、25.00％(3/12)，P=0.014，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。⑵免疫組織化學(xué)染色實驗組胎盤組織HBsAg與HBcAg沒有陽性信號，陽性對照組HBsAg與HBcAg均為陽性，陰性對照未檢出陽性信號。⑶原位聚合酶鏈