2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討新型CRM1抑制劑對(duì)套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)細(xì)胞自噬的影響和機(jī)制。
  方法:應(yīng)用CCK8法檢測新型CRM1抑制劑KPT-185對(duì)8株MCL細(xì)胞的增殖抑制作用、KPT-185聯(lián)合蛋白酶體抑制劑Carfilzomib(CFZ)對(duì)JVM2和JEKO-1細(xì)胞的增殖抑制作用,并用CalcuSyn軟件分析KPT-185與CFZ的聯(lián)合用藥指數(shù)(Combination index,CI);不同濃度的KPT-185作用于JEKO-1和Z-

2、138細(xì)胞后不同時(shí)間,采用MDC熒光染色、MDC染色流式細(xì)胞術(shù)分析自噬小體的形成,Western Blot法檢測LC3 B-Ⅱ蛋白表達(dá)水平,以了解KPT-185對(duì)MCL細(xì)胞自噬的影響;應(yīng)用Western Blot法、RT-PCR技術(shù)和細(xì)胞免疫熒光法檢測KPT-185對(duì)JEKO-1和Z-138細(xì)胞Beclin-1表達(dá)水平的影響。
  結(jié)果:新型CRM1抑制劑KPT-185能明顯抑制8株MCL細(xì)胞增殖,當(dāng)與CFZ聯(lián)合應(yīng)用作用于JEKO

3、-1和JVM2細(xì)胞時(shí),兩藥的聯(lián)合用藥指數(shù)CI在大多數(shù)濃度條件下<1(表明有協(xié)同作用)。KPT-18550nM作用于JEKO-1和Z-138細(xì)胞3h、24h后,MDC染色熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)KPT-18524h組細(xì)胞自噬小體形成較對(duì)照組明顯增多(P<0.05),MDC染色流式細(xì)胞術(shù)分析發(fā)現(xiàn)KPT-1853h組、24h組MDC熒光強(qiáng)度較對(duì)照組增強(qiáng),且24h組強(qiáng)于3h組;KPT-18550nmol/L處理JEKO-1和Z-138細(xì)胞不同時(shí)間(

4、0.5、1、2、3、6、12、24h),Western Blot法顯示24h時(shí)LC3B-Ⅱ蛋白表達(dá)明顯增高(P<0.01);不同濃度(0、25、50、100、200nmol/L) KPT-185處理JEKO-1和Z-138細(xì)胞24h,Western Blot法顯示隨著KPT-185濃度增加,LC3B-Ⅱ蛋白表達(dá)逐漸增強(qiáng)(P<0.05);KPT-18550umol/L、氯喹(CQ)40umol/L、KPT-18550umol/L聯(lián)合CQ4

5、0umol/L作用于JEKO-1和Z-138細(xì)胞24h,KPT-185組、CQ組LC3B-Ⅱ蛋白表達(dá)增高(P<0.05),CQ+KPT-185組LC3 B-Ⅱ蛋白表達(dá)較KPT-185組和CQ組更強(qiáng)(P<0.05)。KPT-18550nmol/L作用于JEKO-1和Z-138細(xì)胞3、6、12、24h后,Western Blot結(jié)果顯示隨著時(shí)間增加,Beclin-1總蛋白表達(dá)水平逐漸升高,24h時(shí)表達(dá)最高(P<0.05),胞質(zhì)Beclin-

6、1表達(dá)在3h時(shí)增強(qiáng)(P<0.05),后逐漸降低,24h時(shí)與對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;KPT-18550nmol/L處理JEKO-1和Z-138細(xì)胞12、24h后,實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示KPT-185處理組Beclin-1 mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組明顯增高(P<005),且24h組高于12h組;KPT-18550nmol/L處理JEKO-1細(xì)胞3、24h后,細(xì)胞免疫熒光檢測結(jié)果顯示3h組Beclin-1蛋白胞核表達(dá)增強(qiáng),24h組Beclin

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