PTEN和Beclin-1在兒童非霍奇金淋巴瘤中的表達及意義.pdf

1、目的：淋巴瘤是兒童常見惡性腫瘤，其發(fā)病率僅次于白血病和顱內(nèi)腫瘤，在小兒惡性腫瘤中占第三位，非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin lymphoma, NHL)是最多見的淋巴瘤，嚴重威脅患兒的生命。近年來，隨著傳統(tǒng)化療方案的不斷完善、造血干細胞移植技術的成熟、腫瘤免疫治療及基因靶向治療藥物的出現(xiàn)，兒童NHL若得到正確的診斷分型和及時治療，國際上其5年無事件生存率（event-free survival, EFS)由70年代的40％升高到目

2、前的70%-90%。即使這樣，仍有部分患兒治療失敗，耐藥、原發(fā)病進展及復發(fā)是治療失敗的主要原因，傳統(tǒng)化療藥物造成的副作用同樣不容忽視，尋找新的治療藥物成為進一步改善預后的關鍵。
　　與張力蛋白同源、第10染色體丟失的磷酸酶(phosphatase and tensin homolog deleted in chromosome10, PTEN）基因是一種抑癌基因，研究表明，PTEN通過調(diào)控多種信號通路發(fā)揮抑制增殖、促進凋亡、影響腫

3、瘤血管生成等抑癌作用，而下調(diào)PI3K/Akt信號通路是最重要的途徑，PI3K/Akt通路在包括NHL的多種腫瘤中異常激活且發(fā)揮著重要的致瘤作用，研究發(fā)現(xiàn)，在子宮內(nèi)膜癌、甲狀腺癌、卵巢癌、胃癌、膠質瘤、成人淋巴瘤等多種腫瘤中存在PTEN基因缺失或失表達。自噬（Autophagy）是細胞利用溶酶體降解自身受損的細胞器和大分子物質的過程，以實現(xiàn)細胞本身的代謝需要和某些細胞器的更新，其是一種保守的細胞防御機制，又是程序性細胞死亡機制。自噬相關基

4、因beclin-1正向調(diào)節(jié)自噬，其與III型PI3K形成復合體是自噬體形成的關鍵步驟。多項研究表明自噬具有抑瘤作用， Beclin-1是一種抑癌基因。Ⅰ型(ClassⅠ)PI3K可抑制自噬活性，PTEN是ClassⅠPI3K途徑的負調(diào)控因子，因此PTEN具有促進細胞自噬的作用。目前國內(nèi)外有關此兩種抑癌基因在兒童NHL中的研究甚少，本研究通過檢測PTEN、Beclin-1在兒童NHL中的表達，并進一步分析此兩種抑癌基因的表達與兒童NHL臨

5、床病理參數(shù)之間的關系以及兩者之間的相關性，以了解此兩種抑癌基因與兒童NHL發(fā)生、發(fā)展的關系，為疾病的診斷、預后判斷及靶向治療提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　選取河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院兒科自2008年1月至2015年5月收治的、以手術切除或者穿刺活檢經(jīng)病理確診的36例NHL患兒的石蠟包埋組織作為實驗組，其中男性患兒24例，女性患兒12例，年齡≤7歲14例，年齡＞7歲22例，T細胞型20例，B細胞型16例，根據(jù)St. Jude臨床

6、分期標準：Ⅰ-Ⅲ期6例，Ⅳ期30例，有B癥狀14例，無B癥狀22例，LDH增高24例，LDH正常12例，根據(jù)國際預后指數(shù)（IPI)評分標準，低度危險組（低危+低中危）15例，高度危險組（高中危+高危）21例，KI-67≤80%為21例，＞80%為15例。另選取26例同期就診的淋巴結反應性增生（lymph node reactive hyperplasia, RH）患兒的石蠟包埋組織作為對照組。采用免疫組織化學S-P法檢測兒童NHL組織及

7、RH組織中PTEN蛋白及Beclin-1蛋白的表達，并進一步分析PTEN蛋白及Beclin-1蛋白的表達與患兒的性別，年齡，免疫分型等指標的關系以及此兩種蛋白表達的相關性。應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包對實驗數(shù)據(jù)進行處理，計數(shù)資料采用χ2檢驗，兩變量相關采用Spearman等級相關分析，以α＝0.05為檢驗標準。
　　結果：
　　1 PTEN蛋白陽性表達于細胞漿，呈黃色或褐色顆粒，36例兒童NHL組織中，PTEN蛋白（-）1

8、9例，（+）16例，（++）1例，陽性率為47.2%（17/36）。26例兒童RH組織中PTEN蛋白（-）5例，（+）21例，陽性率為80.8%（21/26），兩者相比差異有統(tǒng)計學意義（χ2=7.161，P＜0.05）。通過比較PTEN蛋白的表達活性與患兒臨床病理因素的關系發(fā)現(xiàn)，PTEN蛋白在高度危險組陽性率為23.8%，低度危險組陽性率為80%，兩者相比有統(tǒng)計學意義（χ2=11.085，P＜0.05），PTEN蛋白在LDH增高組陽性率

9、是33.3%，LDH正常組陽性率是75%，兩者相比有統(tǒng)計學意義（χ2=5.573， P＜0.05）。PTEN蛋白的表達與患兒性別、年齡、T/B分型、St. Jude分期、有無B組臨床癥狀、Ki-67均無相關性（P＞0.05）。
　　2 Beclin-1蛋白陽性表達于細胞膜、細胞質，呈黃色或棕色顆粒，36例兒童NHL組織中，Beclin-1蛋白（-）18例，（+）10例，（++）5例，（+++）3例，陽性率50%（18/36），26

10、例兒童RH組織中，Beclin-1蛋白（-）4例，（+）6例，（++）7例，（+++）9例，陽性率為84.6%（22/26），與 NHL相比差異有統(tǒng)計學意義（χ2=7.902，P＜0.05）。Beclin-1在兒童NHL中的表達與患兒性別、年齡、T/B分型、St. Jude分期、LDH高低、有無B組臨床癥狀、KI-67及IPI均無相關性（P＞0.05）。
　　3 Spearman等級相關分析顯示，PTEN蛋白和 Beclin-1蛋

11、白在兒童NHL組織中的表達呈正相關（r=0.501，P＜0.05）。
　　結論：
　　1兒童NHL中PTEN蛋白的陽性率減低，PTEN蛋白的表達情況與患兒IPI危險度分層及LDH水平有相關性，高度危險組及增高的LDH水平多伴PTEN蛋白陽性率減低，提示兒童NHL存在PTEN基因的缺失或失表達，且PTEN基因的缺失或失表達可能促進兒童NHL的浸潤、轉移、進展等，可能是預后不良的因素。
　　2兒童NHL中Beclin-1蛋

12、白的陽性率減低，且Beclin-1蛋白的表達情況與患兒的IPI危險度分層、LDH、免疫分型等臨床病理因素無顯著相關性，提示兒童NHL中存在Beclin-1基因的缺失或失表達，尚不能作為判斷預后的指標。
　　3 PTEN蛋白和Beclin-1蛋白在兒童NHL組織中的表達呈正相關，提示此兩種抑癌基因在兒童NHL發(fā)生發(fā)展中可能起協(xié)同作用。
　　4 PTEN基因及Beclin-1基因的缺失或失表達與兒童NHL的發(fā)生發(fā)展密切相關，聯(lián)合