登革病毒2型誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凝血與纖溶相關(guān)分子表達(dá)的研究.pdf

1、　　登革病毒2型誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凝血與纖溶相關(guān)分子表達(dá)的研究
　　研究背景和目的：登革出血熱/登革休克綜合征(Dengue haemorrhagic fever/Dengue shock syndrome,DHF/DSS)主要臨床表現(xiàn)包括出血、血管通透性升高與低血容量性休克等,提示其發(fā)病機(jī)制可能涉及止血缺陷。血管內(nèi)皮細(xì)胞(vein endothelial cells,VECs)在調(diào)節(jié)血管滲透性和維持血液生理狀態(tài)等方面起重要作用,(

2、Dengue virus,DV)登革病毒能夠感染人VECs,但DV對(duì)VECs的促凝和抗凝活性是否存在影響尚不清楚。
　　VECs能夠合成分泌組織因子(tissue factor,TF)、組織因子抑制物(tissue factor inhibitor,TFPI)、血栓調(diào)節(jié)蛋白(thrombomodulin,TM)、組織纖溶酶原激活物(tissue plasminogen activator,tPA)和組織纖溶酶原激活物抑制物1(ti

3、sslle plasrninogen activator inhibitor type-1,PAI-1)等多種重要分子,參與凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)和纖溶系統(tǒng)平衡。VECs有序合成這些分子對(duì)維持血流生理狀態(tài)起關(guān)鍵作用。在本研究中,應(yīng)用DV2感染人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilica vein endothelial cells,HUVECs),觀察DV2對(duì)HUVECs表達(dá)組織因子(TF)、組織因子抑制物(TFPI)和血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)

4、以及組織纖溶酶原激活物(tPA)和纖溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)的影響,以探索血管內(nèi)皮細(xì)胞在DHF/DSS的出血和血漿外滲等重要的病理生理過(guò)程所起的作用。
　　方法：應(yīng)用胰酶消化HUVECs并進(jìn)行傳代培養(yǎng),用生長(zhǎng)良好的第二、三代細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。同時(shí)應(yīng)用(cell counting Kit-8)CCK-8進(jìn)行DV2感染前后的細(xì)胞活性測(cè)定；發(fā)色底物法測(cè)定DV2組和對(duì)照組培養(yǎng)上清液中tPA,PAI-1活性；反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(rev