HPLC-DPPH法篩選黃芩與趕黃草中抗氧化劑及黃酮類化合物構(gòu)效與活性研究.pdf

1、自由基導致的氧化反應不但容易引起各種疾病的發(fā)生，而且容易導致食物變質(zhì)、損害健康、加速衰老。由于其危害性對人們生活、健康、食品等方面造成了較大影響而被人們廣泛關(guān)注。所以，抗氧化劑的添加和應用一直是人們關(guān)注的話題，特別是強效、天然無毒的抗氧化劑，已經(jīng)成為食品保藏技術(shù)和現(xiàn)代保健不可或缺的一部分。因此建立一種快速、有效的篩選抗氧化劑方法顯得尤為重要。目前用于篩選植物提取物中抗氧化劑的方法雖然不少，但由于操作繁瑣、試驗條件苛刻、儀器與試劑昂貴、并

2、且費時費力而難以廣泛應用與普及。本文采用HPLC-DPPH在線篩選法快速篩選中草藥提取物中抗氧化劑，并對其中具有抗氧化活性的化合物進行分離純化，結(jié)合UV,MS，NMR等技術(shù)進行結(jié)構(gòu)鑒定。本方法最顯著的優(yōu)點就是不用分離純化就可以明確知道其提取物中何種化合物具有抗氧化活性，并且此篩選法省時省力、操作簡單易控、結(jié)果直觀明了、響應快速準確、具有良好的重現(xiàn)性。
　　 本文主要做了以下工作：
　　 1、建立了檢測10種不同產(chǎn)地黃芩藥

3、材中黃芩苷含量的高效液相色譜法。實驗證明該方法具有樣品前處理簡單、靈敏度高、重現(xiàn)性良好等優(yōu)點，其檢測結(jié)果可為黃芩的質(zhì)量控制和藥材的優(yōu)劣提供參考。在此基礎(chǔ)上建立了HPLC-DPPH在線篩選抗氧化劑系統(tǒng)，用于篩選黃芩提取物中的抗氧化活性成分，同時比較了黃芩根、莖、葉及10種不同產(chǎn)地黃芩抗氧化活性成分的差異，并對其中抗氧化活性劑進行分離純化且結(jié)合UV，MS，NMR等圖譜對其做了結(jié)構(gòu)鑒定，發(fā)現(xiàn)黃芩素、黃芩苷、二氫黃芩苷、漢黃芩素及野黃芩苷具有一

4、定的抗氧化活性。
　　 2、建立了測定趕黃草中槲皮苷、槲皮素、喬松素葡萄糖苷含量的高效液相色譜法。實驗采用Spherigel ODS C18色譜柱(4.6×200 mm，5μm)，乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動相，梯度洗脫，流速1.0 mL/min。此方法具有較好的精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性。同時運用HPLC-DPPH在線篩選抗氧化劑系統(tǒng)篩選趕黃草提取物中的抗氧化活性成分，比較趕黃草不同部位提取物及道地藥材四川古藺趕黃草與湖南瀏陽引

5、種栽培趕黃草的明顯差異，為趕黃草藥理作用研究、質(zhì)量鑒定及真?zhèn)舞b別提供了重要參考依據(jù)。
　　 3、運用在線HPLC-DPPH系統(tǒng)研究黃酮類化合物結(jié)構(gòu)與抗氧化活性能力的影響機制與規(guī)律，比較了不同環(huán)上羥基的位置、個數(shù)及有無糖苷取代對抗氧化能力大小的影響。該研究對指導我們選擇抗氧化劑作為食品添加劑具有重要參考價值；并在分離純化抗氧化劑時、優(yōu)先從含量較高中草藥中提取抗氧化劑指明了方向；亦為黃酮類化合物的分子修飾和抗氧化劑的人工合成提供了重