內(nèi)毒素耐受的THP-1細(xì)胞系髓系細(xì)胞觸發(fā)受體1表達(dá)的實驗研究.pdf

1、目的：應(yīng)用LPS分兩次刺激人單核細(xì)胞白血病THP-1細(xì)胞系，誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)毒素耐受。了解單核細(xì)胞系統(tǒng)在產(chǎn)生內(nèi)毒素耐受時，TREM-1在核酸和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)，NF-κB在蛋白質(zhì)水平的表達(dá)及TREM-1與NF-κB兩者的關(guān)系。 方法：用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)人THP-1細(xì)胞，將細(xì)胞隨機(jī)分為4組(A、B、C、D)，A為空白對照，B、C、D為實驗組，再將B、C、D分為B1，B2，B3；C1，C2，C3和D1，D2，D3共九個小組。

2、A組用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)THP-1細(xì)胞24h后，再換新無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)6h，A、B、C、D三組分別用含濃度0、0、10、100ng/mLLPS的無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)THP-1細(xì)胞24h，然后依次用含0ng/mLLPS、10ng/mLLPS、100ng/mLLPS和500ng/mLLPS培養(yǎng)A組、B1，C1，D1小組、B2，C2，D2小組及B3，C3，D3小組各6h。提取RNA及總蛋白，以RT-PCR檢測TREM-1mRNA水平的表達(dá)，以Wes

3、ternBlot檢測NF-Kbp65與TREM-1蛋白水平的表達(dá)，以ELISA檢測培養(yǎng)液上清中TNF-a和IL-10的水平。 結(jié)果：A、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2和D3組TREM-1mRNA與β-actin光密度比值依次為：0.5641±0.0031、0.6112±0.0012、0.6860±0.0041、0.8360±0.0034、0.4687±0.0031、0.5862±0.0038、0.5958±0.0

4、032、0.4387±0.0038、0.5762±0.0044、0.5894±0.0041。A、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2和D3組TREM-1蛋白的灰度值與GAPDH灰度比值依次為：0.4698±0.0096、0.5962±0.0044、0.6541±0.0043、0.7617±0.0050、0.4700±0.0042、0.4878±0.0021、0.5204±0.0010、0.3985±0.0036、0.4393±

5、0.0015、0.4953±0.0051。A、B2、B2、B3、C2、C2、C3、D1、D2和D3組NF-κBp65蛋白的灰度值與GAPDH灰度比值依次為：0.7627±0.0009、0.8146±0.0047、0.8661±0.0034、0.9720±0.0065、0.5548±0.0047、0.7852±0.0061、0.8037±0.0052、0.5214±0.0026、0.7742±0.0039、0.7855±0.0041。A、

6、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2和D3組TNF-a的吸光度值依次為：0.0746±0.0032、0.0826±0.0053、0.1201±0.0135、0.1904±0.0135、0.0722±0.0037、0.0821±0.0033、0.0859±0.0031、0.0654±0.0047、0.0748±0.0050、0.0812±0.0042。A、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2和D3組IL-10的吸光度值

7、依次為：0.0929±0.0052、0.1290±0.0053、0.0966±0.0037、0.0802±0.0044、0.1940±0.0091、0.1124±0.0078、0.0849±0.0047、0.2573±0.0055、0.2553±0.0087、0.2259±0.0074。A、B、C、D各組間差異有顯著意義(P＜0.05)；B、C、D各組內(nèi)部小組間差異有顯著意義(P＜0.05)；B1、C1與D1小組、B2、C2與D2小組、

8、B3、C3與D3小組組間差異有顯著意義(P＜0.05)。TREM-1mRNA的表達(dá)與TREM-1蛋白高度正相關(guān)(r=0.922，P=0.000)；TREM-1mRNA表達(dá)水平與NF-κBp65蛋白表達(dá)正相關(guān)(r=0.936，P=0.000)，TREM-1蛋白表達(dá)水平與NF-κBp65蛋白表達(dá)正相關(guān)(r=0.795，P=0.000)，TREM-1mRNA表達(dá)水平與TNF-a正相關(guān)(r=0.901，P=0.000)，TREM-1蛋白表達(dá)與T

9、NF-a水平正相關(guān)(r=0.897，P=0.000)，TREM-1mRNA表達(dá)水平與IL-10負(fù)相關(guān)(r=-0.627，P=0.000)，TREM-1蛋白表達(dá)水平與IL-10負(fù)相關(guān)(r=-0.661，P=0.000)。在未經(jīng)處理的THP-1細(xì)胞，隨著LPS濃度的升高，TREM-1的表達(dá)增加；在內(nèi)毒素耐受THP-1細(xì)胞，首刺激的濃度相同，TREM-1的表達(dá)隨再刺激LPS的濃度升高而升高，而再刺激相同時，首刺激的LPS濃度越高，TREM-1