中藥清絡(luò)方的成分分析.pdf

1、中藥復(fù)方是中醫(yī)臨床最主要的用藥形式，也是中醫(yī)辨證論治理論的具體體現(xiàn)。中藥尤其是中藥復(fù)方的藥效物質(zhì)研究在中醫(yī)藥現(xiàn)代化進程中具有重要意義。本研究以抗血管新生小復(fù)方——清絡(luò)方(QLF)為研究對象，借助高效液相色譜(HPLC)和液相色譜-質(zhì)譜(LC-MSn)聯(lián)用技術(shù)，開展了清絡(luò)方的體內(nèi)、體外成分分析的研究工作。第一部分用高效液相-紫外檢測色譜儀建立了對清絡(luò)方水煎液中五個主要活性生物堿(氧化苦參堿、苦參堿、氧化槐果堿、青藤堿、小檗堿)成分同時進行

2、定量分析的方法。通過認(rèn)真篩選色譜柱、仔細(xì)調(diào)節(jié)流動相組成和pH值并不斷改變梯度洗脫程序，最終優(yōu)化色譜條件，實現(xiàn)在較短的時間內(nèi)(28min)同時對清絡(luò)方五個生物堿成分進行含量測定。文中特別對pH值對各生物堿色譜行為的影響作了認(rèn)真探討，可供色譜理論研究工作參考。通過應(yīng)用該法對清絡(luò)方單味藥水煎液中相應(yīng)生物堿含量進行分析測定，推導(dǎo)了復(fù)方中其他中藥對各生物堿含量的影響。 第二部分主要采用液-質(zhì)聯(lián)用色譜儀對清絡(luò)方各單味藥水煎液、清絡(luò)方復(fù)方水煎

3、液、大鼠空白血漿及大鼠給藥清絡(luò)方后的含藥血漿進行系統(tǒng)全面的分析比較，得到清絡(luò)方被吸收或被轉(zhuǎn)化吸收入血中的分子信息。論文工作首先將復(fù)方與各單味藥的色譜-質(zhì)譜信息對比，找到各成分的單味藥歸屬，再與單味藥的文獻報道數(shù)據(jù)對照，得到復(fù)方中各成分信息；然后將空白血漿與大鼠灌胃清絡(luò)方后三個時間點(20min、1h、2h)取血的含藥血漿對照，得到血漿中新增的成分信息；最后將兩次結(jié)果進行對比(體內(nèi)外對比)，得到清絡(luò)方在大鼠體內(nèi)被吸收或被轉(zhuǎn)化吸收入血中的成

4、分m/z信息：205(N-甲基金雀花堿)、265(槐花醇或苦參中分子量為264的某化合物)、249(1)(槐定堿或異苦參堿或白金雀花堿)、330(青藤堿)、249(2)(苦參堿)和247(槐果堿)；給藥20min后出現(xiàn)清絡(luò)方原藥中不存在的質(zhì)荷比為293和316的兩峰，并且1h和2h血漿均出現(xiàn)這兩個峰，推測可能為小檗堿在生物體內(nèi)的轉(zhuǎn)化物，或清絡(luò)方中其他某些成分的轉(zhuǎn)化物，也不排除可能是清絡(luò)方作用于大鼠后血漿中產(chǎn)生的內(nèi)源性物質(zhì)。其中由小檗堿2

5、到3級質(zhì)譜碎裂峰中出現(xiàn)m/z292峰，推測m/z293峰較可能為小檗堿在生物體內(nèi)的轉(zhuǎn)化物。此外，隨給藥后時間增加，血漿中又陸續(xù)出現(xiàn)了m/z494、760、672分子量較大的質(zhì)譜峰，推測為藥物代謝產(chǎn)物。 總之，本論文建立了清絡(luò)方水煎液中五種活性生物堿類成分同時進行定量分析的HPLC法，對清絡(luò)方及其各單味藥及復(fù)方中五種生物堿的含量進行了測定；揭示了清絡(luò)方各藥單煎與合煎色譜圖差異及主要成分含量變化，得出合煎過程對各成分含量的影響；通過