探討癌基因Aurora-A在腫瘤發(fā)生中作用機制的研究.pdf

1、中心體是一種重要的細胞器。中心體由一對中心粒(centriole)、中心粒之間的連接物質(zhì)(the connection between centtrioles)以及中心粒周圍物質(zhì)(pericentriolar material，PCM)三部分組成。它的主要功能是作為細胞微管組織中心，在細胞有絲分裂期建立起紡錘體的兩極來確保復制的染色體忠實地精確地平均分配到兩個子細胞中，從而維持基因組的穩(wěn)定性。絲/蘇氨酸蛋白激酶Aurora-A在細胞有絲

2、分裂期從的S期早期到G2/M期定位在中心體的PCM區(qū)域，并參與調(diào)節(jié)中心體和微管的功能，確保染色體的忠實分離及胞質(zhì)分裂的順利完成<'5,122>。 Aurora-A基因定位在染色體20q13.2區(qū)域，該區(qū)域在多種腫瘤中擴增<'123-126>。在胃癌、膀胱癌、前列腺癌、結(jié)直腸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和肝癌中,均檢測到Aurora-A基因在DNA水平擴增或者在蛋白、mRNA水平高表達<'28-35>。外源高表達的Aurora-A可以轉(zhuǎn)化NIH

3、3T3和Ratl細胞，表達組成性活化Aurora-A的NIH3T3細胞和表達野生型Aurora-A的Ratl細胞都可以在裸鼠體內(nèi)形成腫瘤<'26,28>。最近有研究表明：Aurora-A可增加轉(zhuǎn)基因小鼠的乳腺癌發(fā)生率<'127>。因此，Aurora-A可認為是一個癌基因(oncogene)。 在中國，食管癌是死亡率排名第四的常見惡性腫瘤。但是，其確切發(fā)病機理仍然不清楚，有待于進一步研究。染色體20q的擴增在食管癌中十分常見<'1

4、28-132>，已有研究表明Aurora-A在食管癌中表達升高<'39-40>，盡管Aurora-A基因定位在染色體20q13.2區(qū)域，然而，迄今未見檢測食管癌組織中Aurora-A DNA的拷貝數(shù)的研究報道。為了探討Aurora-A在食管癌中的可能作用，本研究首先在食管癌標本中檢測了Aurora-A的DNA以及蛋白、mRNA的狀態(tài)，結(jié)果顯示Aurora-A不僅在蛋白、mRNA水平高表達，同時在DNA水平表現(xiàn)出基因擴增。 為了更

5、好地研究Aurora-A在腫瘤發(fā)生中的作用，本研究構(gòu)建了Aurora-A的四環(huán)素誘導表達細胞系，293-TR-Aur-myc。經(jīng)誘導高表達的Aurora-A能夠促進細胞生長以及平板克隆形成能力，并且，高表達Aurora-A的細胞可形成轉(zhuǎn)化灶和在軟瓊脂中形成集落。過表達Aurora-A顯著增加細胞染色體水平的不穩(wěn)定性。在一定時間內(nèi)，隨著Aurora-A誘導表達時間的延長，中心體數(shù)目發(fā)生異常增多的細胞數(shù)也隨之增加；染色體計數(shù)方法顯示Auro