IGF1及B淋巴細胞與Ras癌基因誘導肝腫瘤發(fā)生的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　探究肝癌細胞下調(diào)IGF-1活性的分子機制，并且闡述IGF-1與B淋巴細胞在Ras癌基因誘導肝腫瘤發(fā)生過程中的扮演的角色及二者的關(guān)系。
　　方法:
　　1、提取9月齡H-ras12V轉(zhuǎn)基因雄鼠肝腫瘤組織(T)、腫瘤周圍組織(P)以及9月齡非轉(zhuǎn)基因雄鼠肝組織(Wt)樣本，分別進行病理分析和總蛋白質(zhì)以及總RNA的提取;應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法檢測組織樣本中p-ERK、ERK、p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT蛋白

2、表達;熒光定量PCR檢測IGFBP1、IGFBP3、GHR、IGF-1在組織樣本中的mRNA表達水平;酶聯(lián)免疫分析雄鼠血清中IGF-1、IgG1和IgG2水平。
　　2、采用流式細胞法(FCM)分別檢測3、5和9月齡H-ras12V轉(zhuǎn)基因雄性小鼠及對照組正常C57BL/6J雄性小鼠的外周血中淋巴細胞比例和活性水平，同時對所有小鼠的肝組織進行病理學診斷。
　　結(jié)果:
　　1、蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測結(jié)果顯示，p-ERK的蛋白

3、水平檢測表明:T組織中的p-ERK蛋白水平為21.09±6.57，比Wt組織的0.08±0.02顯著升高，t=5.80，P=0.004，比P組織的8.42±3.21也顯著升高，t=4.95，P=0.005，P組織比Wt組織顯著升高，t=3.75，P=0.042; ERK的蛋白水平檢測表明:T組織中的ERK蛋白水平為15.98±1.94，比Wt組織的4.72±1.00顯著升高，t=4.02，P=0.029，比P組織的4.55±1.12也顯

4、著升高，t=4.92，P=0.005;P-PI3K的蛋白水平檢測結(jié)果表明:T組織中的P-PI3K蛋白水平為0.47±0.02，比Wt組織的0.06±0.00顯著升高，t=9.02，P=0.008，比P組織的0.34±0.05也顯著升高，t=3.09，P=0.042，P組織的比Wt組織的顯著升高，t=3.32，P=0.045;PI3K的蛋白水平檢測結(jié)果表明:T組織中的PI3K蛋白水平為0.78±0.11，比Wt組織的0.03±0.00顯著

5、升高，t=11.05，P＜0.001，比P組織的0.29±0.08也顯著升高，t=3.96，P=0.029，P組織的比Wt組織的顯著升高，t=3.42，P=0.016; p-AKT的蛋白水平檢測結(jié)果表明:T組織中的p-AKT蛋白水平為0.23±0.05，比Wt組織的0.11±0.02顯著升高，t=3.89，P=0.037;AKT的蛋白水平檢測結(jié)果表明:T組織中的AKT蛋白水平為0.18±0.04，比Wt組織的0.06±0.03顯著升高，

6、t=2.87，P=0.042，P組織中的AKT蛋白水平為0.23±0.06，比Wt組織的也顯著升高，t=4.92，P=0.010;熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示，IGFBP1和IGFBP3 mRNA水平在腫瘤組織中顯著性升高;IGF-1和GHR在腫瘤組織中顯著性降低;酶聯(lián)免疫分析結(jié)果顯示，9月齡轉(zhuǎn)基因雄鼠血清中IGF-1水平(1.27±0.35)較同月齡對照組(1.90±0.34)降低，差異有統(tǒng)計學意義，t=-4.225，P=0.020;9

7、月齡轉(zhuǎn)基因雄鼠血清中IgG1水平(39.91±4.86)較同月齡對照組(49.65±7.14)降低，差異有統(tǒng)計學意義，t=-3.845，P=0.011;9月齡轉(zhuǎn)基因雄鼠血清中IgG2水平(28.80±2.45)較同月齡對照組(34.86±4.29)降低，差異有統(tǒng)計學意義，t=-3.024，P=0.006。
　　2、3月齡的H-ras12V轉(zhuǎn)基因雄性小鼠和3、5和9月齡的對照組雄性小鼠的肝臟均未出現(xiàn)顯著的病理學變化。5月齡的H-ra

8、s12V轉(zhuǎn)基因雄性小鼠的肝臟中出現(xiàn)多發(fā)性結(jié)節(jié)，而9月齡的H-ras12V轉(zhuǎn)基因雄性小鼠的肝臟則發(fā)生了多發(fā)性肝腫瘤。轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因小鼠的其他組織器官無顯著病理變化。對于B淋巴細胞，與同月齡的正常C57BL/6J雄性小鼠相比，3、5和9月齡H-ras12V轉(zhuǎn)基因雄性小鼠的外周血中B淋巴細胞所占的比例（sIgM+CD23+和sIgM+B220+）顯著降低(P＜0.01)，活性B淋巴細胞(CD19+CD69+)所占的比例在5和9月齡也都顯著降

9、低(P＜0.05)。并且隨著月齡的增加及H-ras12V轉(zhuǎn)基因雄性小鼠肝腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，外周血B淋巴細胞和活性B淋巴細胞的比例呈逐漸降低趨勢。對于T淋巴細胞，與同月齡正常C57BL/6J雄鼠相比，3、5月齡H-ras12V轉(zhuǎn)基因雄鼠的外周血T淋巴細胞(CD3e+)比例及活性T淋巴細胞(CD3e+CD69+、CD3e+CD25+)比例均無顯著差異(P＞0.05)，但9月齡H-ras12V轉(zhuǎn)基因雄鼠的外周血T淋巴細胞比例及活性T淋巴細胞比