脾胃濕熱證與輔助性T細(xì)胞1-2平衡及人類白細(xì)胞抗原-Ⅱ類基因多態(tài)性的相關(guān)研究.pdf

1、研究目的: 脾胃濕熱作為濕熱證的一個(gè)常見證型，同時(shí)也是中醫(yī)脾胃理論中的一個(gè)重要實(shí)證，尤其在南方地區(qū)尤為多見，涉及的病種廣泛，與消化系統(tǒng)疾病關(guān)系最為密切，尤以慢性胃炎占首位。脾為后天之本，脾胃功能的健旺，是保證機(jī)體抵御外邪的重要因素。目前研究顯示脾胃濕熱證患者機(jī)體內(nèi)出現(xiàn)免疫異常，部分細(xì)胞因子如IL-2、IL-10、TNF-a 等介導(dǎo)了機(jī)體內(nèi)的炎癥反應(yīng)，局部胃粘膜免疫及體液免疫增強(qiáng)。脾胃濕熱證中的局部組織炎癥改變及免疫功能紊亂可能與

2、幽門螺桿菌 (Hp)感染及其導(dǎo)致的免疫反應(yīng)有關(guān)，Hp 感染可能啟動(dòng)了胃粘膜局部免疫反應(yīng)，激活 IFN-γ等細(xì)胞因子，誘使周圍上皮細(xì)胞表達(dá) HIA-Ⅱ類分子，導(dǎo)致輔助性T淋巴(Th)細(xì)胞亞群平衡失調(diào)，出現(xiàn)Th1 細(xì)胞反應(yīng)占優(yōu)。在一定程度上，免疫系統(tǒng)可以認(rèn)為是陰陽平衡的調(diào)節(jié)系統(tǒng)，免疫調(diào)節(jié)也相當(dāng)于是對(duì)陰陽平衡的調(diào)節(jié)。Th1/Th2 細(xì)胞平衡包括其功能性的細(xì)胞因子之間的相互作用、相互制約在一定程度上體現(xiàn)了機(jī)體內(nèi)陰陽相互對(duì)立制約、相互作用。Th1

3、/Th2 細(xì)胞平衡與脾胃濕熱證的陰陽合邪、正邪相爭、陰陽的動(dòng)態(tài)平衡存在著一定的聯(lián)系。HLA-Ⅱ類基因多態(tài)性在一定程度上影響著Th細(xì)胞亞群的分化方向和Th 細(xì)胞亞群活性及增殖。目前研究顯示脾胃與人體免疫系統(tǒng)密切相關(guān)，且認(rèn)為中醫(yī)證型和體質(zhì)與 HLA 基因有關(guān)，脾虛證可能有一定的免疫遺傳學(xué)基礎(chǔ)，素體脾胃盛衰不同對(duì)疾病的易感性及轉(zhuǎn)化存在明顯的差異。 因此，通過研究慢性淺表性胃炎和消化性潰瘍的脾胃濕熱證患者與 Hp 感染的相關(guān)性及血清細(xì)胞

4、因子IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ平及 IFN-γ/IL-4 比值的情況，以及脾胃濕熱證與 HIA-Ⅱ類基因多態(tài)性的相關(guān)性，了解脾胃濕熱證機(jī)體內(nèi)Th1/Th2細(xì)胞免疫平衡狀態(tài)，尋找脾胃濕熱證形成的易感基因，進(jìn)一步揭示脾胃濕熱證的生物學(xué)基礎(chǔ)及發(fā)生機(jī)理，探討脾胃濕熱證的形成實(shí)質(zhì)，從而指導(dǎo)臨床脾胃濕熱證的診斷和治療。 研究方法: 病例組及對(duì)照組均為同時(shí)期廣東地區(qū)籍貫的漢族人，病例組為經(jīng)胃鏡檢查診斷為慢性淺表性胃炎及

5、消化性潰瘍病人，共57例，來源于廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院內(nèi)科病房住院和門診病人，經(jīng)辨證分為脾胃濕熱證(33例)及脾氣虛證(24例)兩組；對(duì)照組15例，為同時(shí)期健康人。采用<'14>C-尿素呼氣試驗(yàn)檢測病例組的Hp感染；采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法測定三組血清細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-10 和IFN-γ值，并比較三組細(xì)胞因子水平和 IFN-γ/IL-4 比值；采用聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性引物 (PCR-SSP)

6、基因分型方法檢測三組人全血的 HIA-Ⅱ類基因中的HLA-DRB1 和-DQA1 的等位基因。 結(jié)果: 脾胃濕熱組 Hp 陽性率顯著高于脾氣虛組(P<0.05)，OR=3.733，顯示脾胃濕熱證與Hp感染相關(guān)。脾胃濕熱組和脾氣虛組IL-2水平均較正常對(duì)照組增高(P<0.05)，但脾胃濕熱組和脾氣虛組IL-2水平比較無顯著差異(P>0.05)；脾胃濕熱組IFN-γ水平和IFN-γ/IL-4 比值均較脾氣虛組和正常對(duì)照組顯著

7、升高(P<0.05)；而脾胃濕熱組IL-4水平均較脾氣虛組和正常對(duì)照組顯著降低(P<0.05)，但I(xiàn)L-10水平僅較脾氣虛組顯著降低(P<0.05)，而與正常對(duì)照組相比無顯著差異(P>0.05)；脾氣虛組IL-10水平較正常對(duì)照組顯著升高 (P<0.05)；另外，Hp(+)組IFN-γ水平和IFN-γ/IL-4比值均較Hp(-)顯著升高(P<0.05)，但是IL-2、IL-4及IL-10 水平兩組之間無顯著差異 (P>0.05)。DQA

8、1*0103 基因型在脾胃濕熱組顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05)，OR=4.48，提示 DQA1*0103 與脾胃濕熱證相關(guān)，但與脾氣虛組比較無明顯差異；DQA1*0601 基因型在脾胃濕熱組顯著低于正常對(duì)照組及脾氣虛組 (P<0.05)，但OR=0.156，提示DQA1*0601 與脾胃濕熱證的相關(guān)度較強(qiáng)。但HIA-DRB1各基因型在三組之間無顯著性差異 (P>0.05)。 結(jié)論:結(jié)果顯示慢性淺表性胃炎和消化性潰瘍中脾胃濕熱

9、證患者和。Hp感染相關(guān)，機(jī)體出現(xiàn)了Th1/Th2 細(xì)胞免疫失衡，以Th1 細(xì)胞反應(yīng)占優(yōu)勢，表現(xiàn)為IL-2、IFN-γ水平的升高，IL-4 水平的降低，IL-10水平的異常，細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)紊亂。脾胃濕熱證中Th1/Th2平衡偏倚，免疫調(diào)節(jié)失衡，正是機(jī)體內(nèi)陰陽失調(diào)、邪正相爭、互相消長的體現(xiàn)。脾胃濕熱證中IL-2、IFN-γ等促炎細(xì)胞因子水平升高，抑炎因子IL-4降低，引起持續(xù)的免疫應(yīng)答，造成炎癥病理損害，這與濕熱證中熱邪致病之性相似；但同時(shí)通

10、過IL-10的抗炎作用，從而抑制免疫免疫反應(yīng)，減緩炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致脾胃濕熱證病變緩慢。Th1型細(xì)胞因子和Th2型細(xì)胞因子共同作用，相互制約，導(dǎo)致脾胃濕熱證起病緩慢，病勢纏綿，這可能是濕熱證纏綿難愈的病理機(jī)制之一。而Hp感染導(dǎo)致Th1/Th2免疫平衡偏移，也可能造成脾胃濕熱證機(jī)體內(nèi)Th1 細(xì)胞反應(yīng)占優(yōu)的原因之一。脾胃濕熱證與HLA-DQA1*0103基因型呈正相關(guān)，與HLA-DQA1*0601 呈負(fù)相關(guān)，脾胃濕熱證存在著一定的免疫遺傳學(xué)基礎(chǔ)

11、，DQA1*0103 基因型可能是脾胃濕熱證的易感基因，DQA1*0601 可能是脾胃濕熱證的保護(hù)性基因。正是 HLA-Ⅱ類易感基因通過編碼的HLA-Ⅱ類分子識(shí)別和結(jié)合導(dǎo)致脾胃濕熱證的感染因子或抗原刺激物，遞呈給Th細(xì)胞，調(diào)控Th細(xì)胞的增殖和分化，影響免疫應(yīng)答，從而形成脾胃濕熱證。這提示脾胃濕熱證可能存在著免疫遺傳易感因素和病原體等感染的病因，故容易導(dǎo)致“脾土衰弱，失健運(yùn)之堤防，濕氣停聚不化”，再加遭受濕熱外邪的入侵，內(nèi)外合邪，從而誘發(fā)