同一載體雙靶點干擾紫杉醇耐藥的實驗研究.pdf

1、徐州醫(yī)學院碩士學位論文同一載體雙靶點干擾紫杉醇耐藥的實驗研究姓名：周一舟申請學位級別：碩士專業(yè)：腫瘤學指導教師：杜秀平201204徐州醫(yī)學院碩士學位論丈莉約引芙指標：糾胞生長抑制率(IR)、細№、卜數(shù)抑制濃度(IC50)、，付藥指數(shù)(RI)、棚劉‘逆轉(zhuǎn)效率。結(jié)果1誘導A549／Tax細胞，使該細胞能在1定濃度的紫杉醇環(huán)境’∥|長。A549和A549／Tax細胞生長曲線比較顯示，A549／Tax細胞增殖較親本細胞快，指數(shù)生長期稍早fB現(xiàn)(

2、傳代后3～4d)，而A549細胞指數(shù)生長期則在第4～5天。A549和A549／‘j、ax細胞倍增時『白J分別為33466土O583小時和423401490小時，耐藥細胞倍增時間是親代細胞的1265倍(PO05)，增殖速度明顯減慢。2加紫杉醇后，A549／Tax細胞相對A549細胞耐藥指數(shù)升高。A549對紫杉醇的IC50為00167土O0026mg／L，A549／Tax細胞對紫杉醇的IC50為05933士04611mg／L，A549／Ta

3、x細胞對Tax的耐藥指數(shù)(RI)為3608士486倍(P005)。3用轉(zhuǎn)移質(zhì)粒(PLB，bcl—2一stathmin／shRNA、PLB—bcl—2shRNA矛口PLB—stathmin／shRNAl、包裝質(zhì)?！鱊RF和包膜蛋白質(zhì)粒VSV—G共轉(zhuǎn)染293FT病毒包裝細胞后，熒光顯微鏡下觀察到較強的綠色熒光蛋白表達，轉(zhuǎn)染率約為80％。表明慢病毒顆粒包裝『F確。4用包裝好的慢病毒干擾載體分別感染A549／Tax細胞，48小時后熒光顯微鏡下觀

4、察綠色熒光蛋白表達，轉(zhuǎn)染率約為536土24％，表明轉(zhuǎn)染成功。5盯PCR及Westemblot顯示bcl一2A549／Tax細胞組，對bcl—2在mRNA水平的抑制率為23土001％，在蛋白水平的抑制率為12土001％(PO05)；stathminA549／Tax細胞組，對stathmin在mI礬A水平的抑制率為20土002％，在蛋白水平的抑制率為17士002％(P005)；雙靶點B—SA549／Tax細胞組，對bcl—2在mRNA水平的