同型半胱氨酸誘導實驗性心力衰竭大鼠心肌細胞凋亡及核因子-κB表達的研究.pdf

1、背景
　　 同型半胱氨酸（HCY）是一種含巰基氨基酸，現有臨床資料表明血漿同型半胱氨酸水平升高已被證明是冠心病的獨立危險因素，但致病機制尚未完全明了。國內外尚未有HHCY導致冠心病心衰的研究報道，且導致心衰的發(fā)生機制尚未明確。核因子-KB（NF-KB）是調節(jié)基因轉錄的重要因子，近來的研究表明NF-KB在心衰的發(fā)生發(fā)展中起到了重要的作用，是當前研究的熱點。本研究通過給予Wistar大鼠低、中、高劑量HCY誘導飲食12周后，建立冠心

2、病心力衰竭模型動物模型，光鏡下觀察心肌組織形態(tài)學變化，用Tunel染色觀察心肌細胞凋亡情況。行EMSA測量心肌組織中的NF-KB，觀察高同型半胱氨酸血癥與心衰的相關性，NF-KB在心衰中的表達。
　　 材料和方法
　　 成年健康Wistar大鼠60只隨機分為三組，分別給予低、中、高劑量HCY誘導飲食約12周形成不同水平的HHCY。
　　 1.實驗過程中觀察大鼠的精神、活動、進食、毛色等情況。
　　 2.心

3、肌組織形態(tài)學檢查：取左室心肌適量大小，常規(guī)固定、包埋、HE染色后行光鏡觀察。
　　 3.心肌細胞凋亡指數（apoptotoc index，AI）：于左心室心尖部固定部位取適量全層心肌組織，按常規(guī)病理組織學方法制備心肌石蠟標本，采用脫氧核糖核酸末端轉移酶介導的缺口末端標記法（TUNEL法）檢測凋亡心肌細胞。具體按照原位凋亡檢測試劑盒說明書進行操作。細胞核呈棕黃色或者棕褐色顆粒特征，判定為凋亡細胞。光鏡下根據凋亡陽性細胞分布情況，每

4、張切片拍攝5個陽性視野，以陽性細胞數所占觀察心肌細胞的比例作為凋亡率，即心肌細胞凋亡指數（％）=（凋亡心肌細胞核數/正常心肌細胞核數）×100％。計算心肌細胞凋亡指數，應用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件分析。
　　 4.從心肌組織中提取核蛋白（具體按照細胞核蛋白提取試劑盒的說明書進行操作）。應用EMSA測量心肌組織NF-κB的活性（具體步驟按照凝膠遷移率分析試劑盒說明進行操作）：①制備聚丙烯酰胺膠和預電泳。②制備結合反應液。③加樣后

5、電泳。④電泳轉移反應體系到尼龍膜。⑤交聯固定DNA。⑥通過化學發(fā)光反應檢測生物素標記DNA。⑦曝光成像。計算其條帶灰度值，應用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件分析。
　　 結果：
　　 1.12周之后，大鼠心力衰竭模型成功建立。
　　 2.光鏡下形態(tài)學變化：與對照組相比，模型組心肌損傷程度明顯加重。高劑量組破壞程度比低劑量組嚴重。其中低、中劑量組具有相似的形態(tài)學變化。
　　 3.與對照組相比（2.90±0.89

6、％），模型組心肌細胞凋亡指數明顯增高（P<0.01），高劑量組心肌細胞凋亡指數（14.17±2.73％）明顯高于中劑量組（8.70±1.92％）（P<0.01），低劑量組（7.35±1.26％）和中劑量組（8.70±1.92％）之間無明顯差別（P=0.139）。
　　 4.與對照組（條帶灰度值為272.64±26.51）相比，模型組NF-κB的活性明顯增高（P<0.01）。在模型組中，NF-κB的活性為高劑量組（條帶灰度值為78

7、0.07±45.34）明顯高于中劑量組（條帶灰度值為617.61±45.63）（P<0.01），中劑量組（條帶灰度值為617.61±45.63）明顯高于低劑量組（條帶灰度值為485.00±36.07）（P<0.01）。
　　 結論：
　　 1.同型半胱氨酸能誘導大鼠心衰，并且心衰的嚴重程度與喂養(yǎng)大鼠的同型半胱氨酸的劑量密切相關。
　　 2.心衰組大鼠的NF-κB活性明顯增高，心衰的嚴重程度與NF-κB活性密切相關