枸杞多糖對(duì)外源一氧化氮損傷下小鼠胰島細(xì)胞功能的影響.pdf

1、【目的】 1、研究枸杞多糖(LBP)對(duì)外源性一氧化氮損傷下小鼠胰島細(xì)胞(NIT-1)功能的影響。2、研究枸杞多糖對(duì)外源性一氧化氮損傷下小鼠胰島細(xì)胞凋亡及bcl-2和bax基因表達(dá)的影響。 【材料與方法】體外常規(guī)培養(yǎng)小鼠胰島細(xì)胞NIT-1，用含15％胎牛血清的DMEM低糖培養(yǎng)液于5％CO2，37℃的培養(yǎng)箱培養(yǎng)，用40mmol/l硝普鈉(SNP)及不同濃度枸杞多糖(200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml)進(jìn)行干

2、預(yù)，使用MTT比色法檢測(cè)各組的細(xì)胞增殖活性、放射免疫法測(cè)定低糖和高糖刺激下胰島素的分泌水平、測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液中NO濃度，SOD活性、MDA含量、流式細(xì)胞儀(FCM)測(cè)定細(xì)胞凋亡百分率的變化，用半定量RT-PCR技術(shù)測(cè)定各組bcl-2和bax基因的表達(dá)。 【結(jié)果】 1.細(xì)胞增殖活性：與空白對(duì)照組相比，SNP組細(xì)胞增殖活性顯著下降(P<0.01).而枸杞多糖組(200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml)能夠明顯抑制

3、SNP所引起的NIT-1細(xì)胞活性的降低(P<0.05)。 2.胰島素分泌水平的測(cè)定，在低濃度的葡萄糖刺激下，各組的胰島素分泌量沒有明顯差別((P>0.05)。在高糖刺激下時(shí)，SNP組胰島素分泌量明顯降低(P<0.01vs control)。各枸杞多糖組胰島素分泌量與SNP組相比有明顯地升高(P<0.05)。 3.與空白對(duì)照組相比SNP組細(xì)胞培養(yǎng)液中NO濃度，MDA含量明顯升高(P<0.01)，SOD活性顯著下降(P<0.

4、01)；在給與枸杞多糖后，NO含量和MDA濃度明顯降低(P<0.05)，SOD活性顯著上升(P<0.05)。 4.細(xì)胞凋亡率變化，F(xiàn)CM測(cè)定結(jié)果顯示，NIT-1細(xì)胞經(jīng)SNP作用后，細(xì)胞凋亡率明顯升高(P<0.01 vs contro1)，與SNP組相比，各枸杞多糖組細(xì)胞凋亡率明顯降低(P<0.05)。 5.bcl-2mRNA和baxmRNA的表達(dá)，與空白對(duì)照組相比較，SNP組bcl-2 mRNA的表達(dá)減弱而baxmRNA