云南省德宏州HCV分子流行病學(xué)研究及黑猩猩SAMHD1表達(dá)載體的構(gòu)建與真核表達(dá).pdf

1、丙型肝炎病毒(Hepatitis CVirus，HCV)能感染人肝臟細(xì)胞，引起急性和慢性的肝炎，嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康。根據(jù)核苷酸序列的差異，HCV可分為6個(gè)基因型，而每個(gè)基因型又可分為很多亞型。HCV基因型分布具有明顯的地域性差異，其中基因型1、2、3在全球普遍流行，而基因型4、5、6的分布范圍較窄，呈現(xiàn)出地方性流行。在我國(guó)主要流行基因型1、2、3和6。
　　HCV的傳播與毒品轉(zhuǎn)運(yùn)途徑密切相關(guān)，靜脈吸毒已成為HCV傳播的一個(gè)重要途徑。

2、位于中緬邊境的德宏傣族景頗族自治州是中緬之間重要的通商口岸，貿(mào)易交流頻繁，也是毒品從生產(chǎn)基地“金三角”向中國(guó)內(nèi)陸及其他鄰近國(guó)家轉(zhuǎn)運(yùn)的重要通道，德宏也成為HCV感染的重災(zāi)區(qū)。因此，對(duì)德宏地區(qū)靜脈吸毒人群深入進(jìn)行分子流行病學(xué)調(diào)查，了解德宏靜脈吸毒人群HCV分子流行病學(xué)特征和傳播趨勢(shì)，對(duì)制定HCV防控策略具有重要的參考價(jià)值。在本研究中我們篩查的德宏靜脈吸毒者的血液樣品中共有264份為HCV陽(yáng)性樣品。經(jīng)過(guò)病毒RNA抽提，反轉(zhuǎn)錄巢式PCR擴(kuò)增C/

3、E2、NS5B片段和測(cè)序，分別對(duì)獲得的C/E2序列和NS5B序列進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析，確定其基因型。最終共獲得190份HCV陽(yáng)性樣本的序列，包括180條C/E2和152條NS5B片段序列。分型結(jié)果顯示，190份樣品中1a亞型17例、1b亞型2例、3a亞型16例、3b亞型69例、6n亞型32例、6u亞型28例，另外1例疑似雙感染或重組，有5例為新亞型6x。通過(guò)對(duì)德宏和其它地區(qū)HCV基因型分布的比較發(fā)現(xiàn)，德宏HCV基因型分布與其它地區(qū)顯著不同，

4、其中3b亞型所占比例明顯高于其它地區(qū)，而1b亞型檢出率很低。值得注意的是，德宏HCV6u亞型所占比例高達(dá)15％。6u亞型病毒最初是2008年由一株來(lái)自德宏的分離株經(jīng)全基因組測(cè)序后命名的，系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示該毒株能與之前兩株來(lái)自緬甸的病毒株聚集在一起，此后在中國(guó)其他地區(qū)陸續(xù)發(fā)現(xiàn)新的6u病毒株，但流行率都很低（低于2％）。因此6u亞型病毒在德宏的高流行率表明德宏可能是6u亞型的起源地或者是6u亞型從緬甸向中國(guó)內(nèi)陸傳播的入口。此外，從系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)

5、上可以看出，有5個(gè)分離株聚集在亞型6m和6n之間，隨后通過(guò)遺傳距離分析確定其為新的亞型6x。與數(shù)據(jù)庫(kù)中其他聚集在6m和6n之間的未分型的序列DH027一起構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)發(fā)現(xiàn)，這五個(gè)6x亞型的分離株不能和DH027聚集在一起。由于DH027同樣來(lái)自于德宏，說(shuō)明HCV基因型6在德宏的流行情況極其復(fù)雜，還存在很多未知的新亞型。
　　HIV與HCV享有相同的傳播途徑，我們對(duì)HIV的關(guān)注點(diǎn)在于其病毒輔助蛋白與限制因子的相互作用上。SAMHD

6、1是最新發(fā)現(xiàn)的HIV限制因子，能限制HIV-1對(duì)髓系細(xì)胞的感染，但是其限制作用被HIV-1的輔助蛋白Vpx拮抗，原因是Vpx能誘導(dǎo)SAMHD1進(jìn)入宿主細(xì)胞蛋白酶體降解。對(duì)靈長(zhǎng)類(lèi)SAMHD1和慢病毒輔助蛋白Vpx及Vpr的研究發(fā)現(xiàn)，慢病毒輔助蛋白Vpx/Vpr誘導(dǎo)SAMHD1降解具有種屬特異性。運(yùn)用祖先狀態(tài)構(gòu)建和時(shí)空動(dòng)力學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)靈長(zhǎng)類(lèi)SAMHD1與慢病毒Vpx的共進(jìn)化導(dǎo)致在HIV-1祖先病毒中vpx基因的丟失。我們推測(cè)HIV-1祖先病