宮內(nèi)缺氧及當歸注射液對幼年大鼠齒狀回神經(jīng)元與學習記憶的影響.pdf

1、目的：探討宮內(nèi)缺氧對幼年大鼠海馬齒狀回神經(jīng)元與學習記憶的影響與NMDAR1 mRNA在其新生鼠海馬齒狀回的表達的關系，并研究當歸對其的保護作用。 方法：健康SD孕鼠30只，隨機分為對照組、缺氧組和當歸組各10只。于孕14d開始將缺氧組孕鼠置于三氣培養(yǎng)箱中，缺氧2h/d，連續(xù)缺氧5d，制作胎鼠宮內(nèi)缺氧模型，每天缺氧前1h經(jīng)尾靜脈注射生理鹽水（8mL/Kg），連續(xù)7d（孕14d—20d，孕19d和孕20d雖不缺氧但仍注射生理鹽水）；

2、當歸組用當歸注射液代替生理鹽水，余同缺氧組；對照組不缺氧，余同缺氧組。三組孕鼠分娩（孕21d）當日每窩隨機選取新生鼠2只，取腦組織、40g/L多聚甲醛固定，石蠟包埋；余新生鼠每窩隨機選取2只飼養(yǎng)至30d（30日齡），進行為期11d的Morris水迷宮測試，水迷宮測試結(jié)束當日，幼鼠經(jīng)40g/L多聚甲醛灌注固定、取腦，石蠟包埋，切片。新生鼠腦組織作NMDAR1 mRNA原位雜交、幼年大鼠腦組織作NSE mRNA原位雜交（ISH）。操作步驟：

3、①切片常規(guī)脫蠟至水（試劑中加入DEPC）。②胃蛋白酶消化，暴露核酸探針結(jié)合位點（18℃—23℃，胃蛋白酶濃度：1．5mL30g/L檸檬酸加2滴胃蛋白酶，消化6min）。③10g/L多聚甲醛后固定。④滴加預雜交液，40℃3h。⑤滴加探針雜交液，加蓋專用蓋片，40℃過夜。⑥沖洗后滴加生物素化鼠抗地高辛，室溫2h。⑦滴加生物素化過氧化物酶，室溫30min。⑧滴加SABC—POD，室溫30min。⑨DAB避光顯色5—10min（鏡下控制顯色時間

4、）。⑩切片常規(guī)脫水、透明、封片。每張切片在400倍下用OLYMPUS Ax—70顯微成像系統(tǒng)對海馬齒狀回拍照。IPP6．0軟件圖像分析。水迷宮實驗記錄探查訓練時幼鼠在目標象限的搜索時間（T1）和對位探查訓練時幼鼠在目標象限的搜索時間（T2）。統(tǒng)計學分析：組間比較用方差分析，兩兩比較用LSD檢驗。 結(jié)果：Morris水迷宮實驗顯示缺氧組幼年大鼠探查測試和對位探查測試時間較對照組縮短，當歸組較缺氧組延長，差異有統(tǒng)計學意義（P<0．0

5、5）。NSE mRNA原位雜交結(jié)果顯示缺氧組大鼠海馬齒狀回陽性細胞數(shù)量和積分光密度（integral optical density，IOD）值均較對照組減小，當歸組較缺氧組增大，差異有統(tǒng)計學意義（P<0．05）；NMDAR1 mRNA原位雜交顯示缺氧組大鼠海馬齒狀回陽性細胞IOD值較對照組增大，當歸組較缺氧組減小，差異有統(tǒng)計學意義（P<0．05）。 結(jié)論：⑴一定時間（2h/d，持續(xù)5d）、一定氧濃度（氧濃度130mL/L）的宮