便秘型腸易激綜合征模型大鼠腸神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元的變化.pdf

1、研究背景腸易激綜合征（irritable bowel syndrome，IBS）是最常見的一種功能性胃腸病，可分為便秘型（IBS-C）、腹瀉型（IBS-D）、混合型（IBS-M）和不定型（IBS-U）。其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，其中IBS-C患者存在腸道動(dòng)力、內(nèi)臟高敏、腦-腸軸調(diào)節(jié)等多方面的異常。冰水灌胃大鼠模型可較好地模擬IBS-C中糞便性狀、內(nèi)臟敏感性的改變，腸神經(jīng)系統(tǒng)（ENS）的變化可能在IBS發(fā)病中起一定作用。
　　 研究目的（1

2、）通過制作結(jié)腸和回腸粘膜下神經(jīng)叢和肌間神經(jīng)叢鋪片標(biāo)本，采用免疫組織熒光雙染法，分別對(duì)腸神經(jīng)元總數(shù)以及ChAT、VIP、NOS和Calretinin免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元（以下簡(jiǎn)稱陽(yáng)性神經(jīng)元）進(jìn)行定量分析，評(píng)估IBS-C模型大鼠中上述不同功能神經(jīng)元發(fā)生的變化，結(jié)合大鼠糞便性狀和腸道功能的變化，推測(cè)其對(duì)腸道運(yùn)動(dòng)和分泌功能的影響。（2）檢測(cè)IBS-C大鼠胃排空功能，采用免疫組織熒光雙染法對(duì)其胃幽門端肌間神經(jīng)叢ChAT、NOS陽(yáng)性神經(jīng)元進(jìn)行定量分析

3、，評(píng)估IBS-C模型大鼠胃神經(jīng)元的變化及其對(duì)胃排空功能的影響。探討ENS在IBS-C以及功能性胃腸病重疊癥發(fā)病中的作用。
　　 材料與方法選用健康成年雄性Wistar大鼠，分為冰水灌胃IBS-C組和對(duì)照組。觀察大鼠糞便顆粒數(shù)、糞便含水量的變化以及胃腸道運(yùn)動(dòng)功能。制作大鼠回腸和結(jié)腸粘膜下神經(jīng)叢及肌間神經(jīng)叢鋪片標(biāo)本及胃幽門端切片標(biāo)本，采用免疫組織熒光雙染法分別檢測(cè)腸道神經(jīng)叢中ChAT、VIP、NOS和Calretinin陽(yáng)性神經(jīng)元和

4、胃肌間神經(jīng)叢ChAT和NOS陽(yáng)性神經(jīng)元，進(jìn)行計(jì)數(shù)和定量分析。
　　 結(jié)果：（1）冰水灌胃后，大鼠糞便顆粒數(shù)和含水量均減少，腸道傳輸功能無明顯改變，但胃排空加快。（2）IBS-C模型大鼠回腸粘膜下神經(jīng)叢ChAT陽(yáng)性神經(jīng)元比例（79.0±1.6％vs82.9±2.5％，P=0.004）、每個(gè)神經(jīng)節(jié)內(nèi)ChAT陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)（3.0±0.5 vs3.8±0.6，P=0.027）顯著低于對(duì)照組；VIP陽(yáng)性神經(jīng)元比例（21.4±7.0％vsp

5、35.7±9.2％，P=0.007）和每個(gè)神經(jīng)節(jié)內(nèi)VIP陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)（0.9±0.2 vs1.3±0.2，P=0.003）、NOS陽(yáng)性神經(jīng)元比例（7.5±2.9％vs16.2±6.1％，P=0.015）均顯著低于對(duì)照組，表明回腸粘膜下神經(jīng)叢分泌運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元減少；IBS-C組回腸肌間神經(jīng)叢NOS陽(yáng)性神經(jīng)元比例顯著高于對(duì)照組（34.0±4.8％vs28.6±2.7％，P=0.028）。（3）IBS-C模型大鼠結(jié)腸粘膜下神經(jīng)叢VIP陽(yáng)性神經(jīng)元比

6、例（50.3±7.2％vs61.3±5.0％，P=0.006）和NOS神經(jīng)元比例（11.2±2.5％vs14.9±3.3％，P=0.038）顯著低于對(duì)照組；IBS-C組結(jié)腸肌間神經(jīng)叢NOS陽(yáng)性神經(jīng)元比例顯著高于對(duì)照組（30.9±5.9％vs23.0±4.6％，P=0.015）。（4）IBS-C模型大鼠胃排空加快（89.0±7.0％vs78.2±5.8％，P=0.016），胃肌間神經(jīng)叢中ChAT陽(yáng)性神經(jīng)元比例高于對(duì)照組（79.0±2.4％

7、vs68.3±1.0％，P=0.029），NOS陽(yáng)性神經(jīng)元比例數(shù)低于對(duì)照組（18.9±5.0％vs33.1±4.5％，P=0.000），提示胃排空加快可能與胃肌間神經(jīng)叢興奮性神經(jīng)元增多、抑制性神經(jīng)元減少有關(guān)。
　　 結(jié)論（1）IBS-C模型大鼠回腸和結(jié)腸粘膜下神經(jīng)叢內(nèi)VIP陽(yáng)性分泌運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元減少，回腸粘膜下神經(jīng)叢膽堿能神經(jīng)元減少，提示粘膜下神經(jīng)叢分泌運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元調(diào)控的分泌功能減弱可能在IBS-C的發(fā)病中發(fā)揮重要作用。IBS-C模型