內(nèi)源性氫化可的松代謝與環(huán)孢霉素血藥濃度劑量比的相關(guān)性研究.pdf

1、目的 研究尿中氫化可的松（F）及可的松（E）6β-羥基化代謝率與環(huán)孢霉素（CsA）血藥濃度劑量比的相關(guān)性。方法 尿中F和E采用高效液相色譜紫外吸收法（HPLC-UV）測(cè)定。采用Diamonsil C18色譜柱（200×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為甲醇-0.1％甲酸水溶液進(jìn)行梯度洗脫，流速為1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。樣品提取劑為二氯甲烷。尿中6β-羥基化氫化可的松（6β-OHF）和6β-羥基化可的松（6β-OHE

2、）的濃度也采用HPLC-UV法測(cè)定。采用Diamonsil C18色譜柱（200×4.6 mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-0.1％甲酸水溶液進(jìn)行梯度洗脫，流速為1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為244 nm。樣品處理包括以下步驟：尿樣上Oasis HLB固相萃取柱后被乙酸乙酯-乙醚的混合溶劑洗脫，有機(jī)相再用硫酸鈉飽和的堿液和酸液洗雜質(zhì)。在腎移植患者尿中F及E的6β羥基化代謝率與CsA血藥濃度劑量比的相關(guān)性研究中，共有105名腎移植病人（

3、80名男性，25名女性）參加了該試驗(yàn)。在試驗(yàn)當(dāng)天清晨受試者服用CsA前，收集血樣和尿樣各約5 mL。尿中6β-OHF、6β-OHE、F和E的濃度用HPLC-UV法測(cè)定。全血中CsA穩(wěn)態(tài)谷濃度用熒光偏振免疫分析法（FPIA）測(cè)定。采用Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)比較尿中6β-OHF+6β-OHE/F+E和CsA血藥濃度劑量比（C/D）、6β-OHF+6β-OHE/F+E和體重校正的CsA血藥濃度劑量比（C/D/W）之間的相關(guān)性，同時(shí)采用Wi

4、lcoxon秩和檢驗(yàn)比較各項(xiàng)指標(biāo)之間的差異。結(jié)果 F、E和內(nèi)標(biāo)峰在該色譜條件下得到較好分離。尿中F和E的定量下限均為5.0 ng·ml-1，3種不同濃度下測(cè)得的準(zhǔn)確度在89.74％和107.64％之間，日內(nèi)和日間精密度均小于12.21％。尿中F和E在5.0-320.0和5.0-400.0 ng·ml-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。尿中6β-OHF、6β-OHE和內(nèi)標(biāo)峰在該色譜條件下也得到較好分離。6β-OHF和6β-OHE的定量下限均為

5、5.0 ng·ml-1，3種不同濃度下測(cè)得的準(zhǔn)確度在92.16％和109.77％之間，日內(nèi)和日間精密度均小于7.4％。6β-OHF和6β-OHE在5.0-500.0和5.0-400.0 ng·ml-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。在腎移植患者尿中F及E的6β羥基化代謝率與CsA血藥濃度劑量比的相關(guān)性研究中，無(wú)論考慮全部受試者以及男性或女性受試者的數(shù)據(jù)，6β-OHF+6β-OHE/ F+E與C/D、C/D/W均存在一定相關(guān)性。各項(xiàng)指標(biāo)在術(shù)后不同

6、時(shí)間同樣存在相關(guān)性。鈣通道阻滯劑合用組較不合用組則表現(xiàn)出相對(duì)較弱的負(fù)相關(guān)。6β-OHF+6β-OHE/F+E在術(shù)后不同時(shí)間段沒(méi)有明顯差異，而C/D、C/D/W則存在顯著性差異。6β-OHF+6β-OHE/F+E和C/D存在性別間差異，而C/D/W則沒(méi)有表現(xiàn)出明顯的性別間差異。合用鈣通道阻滯劑使6β-OHF+6β-OHE/F+E顯著降低，而C/D和C/D/W則沒(méi)有明顯變化。結(jié)論 本研究提供了兩種簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確的高效液相紫外檢測(cè)法，適用