大黃酸對ATP誘導(dǎo)的滑膜細(xì)胞鈣內(nèi)流和ROS產(chǎn)生的影響及機(jī)制.pdf

1、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）是一種以滑膜關(guān)節(jié)炎為主要特征的慢性全身性疾病，其發(fā)病機(jī)制目前還未清楚闡明，至今仍無有效預(yù)防手段和特效治療藥物，現(xiàn)使用的治療藥物大多副作用較大。因此，更深入地研究RA的發(fā)病機(jī)理，尋找新的治療藥物及藥物作用靶點，對RA的治療有重要意義。大黃酸(Rhein)是中藥大黃、蘆薈的主要有效成分，具有抗炎、抗腫瘤等作用。大黃酸對治療骨關(guān)節(jié)炎有很好的效果（臨床藥物雙醋瑞因的體內(nèi)活性成分即為大黃酸），但其對于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA

2、)是否有效尚未見報道。
　　 滑膜病變在RA中具有重要地位，滑膜組織和細(xì)胞能通過分泌各種細(xì)胞因子（如白細(xì)胞介素，趨化因子等）調(diào)節(jié)持續(xù)性炎癥，并可通過分泌金屬基質(zhì)蛋白酶(MMPs)、組織蛋白酶等破壞骨和軟骨。已有的研究表明，人滑膜細(xì)胞上存在P2X7受體的表達(dá)，該受體的激活可增加細(xì)胞因子IL-6的產(chǎn)生，而且，P2X7受體缺陷型動物會導(dǎo)致關(guān)節(jié)發(fā)炎，這些結(jié)果提示P2X7受體可能與RA有關(guān)。
　　 在本文中，構(gòu)建了膠原誘導(dǎo)的大鼠關(guān)

3、節(jié)炎模型，并從中提取了成纖維樣滑膜細(xì)胞。以該滑膜細(xì)胞及外源表達(dá)P2X7蛋白的HEK293細(xì)胞為對象，研究了ATP、BzATP活化P2X7通道誘導(dǎo)的胞內(nèi)[Ca2+]i變化及ROS產(chǎn)生，并研究了大黃酸的抑制作用。得到了如下研究結(jié)果:
　　 (1)RA大鼠滑膜細(xì)胞上存在P2X7通道的表達(dá)(mRNA水平)。
　　 (2)生理性P2X7受體激動劑ATP(1 mM)可引起滑膜細(xì)胞和HEK-P2X7細(xì)胞[Ca2+]i升高，[Ca2+]

4、i升高的來源主要為鈣內(nèi)流，且可被P2X7受體特異性阻斷劑考馬斯亮藍(lán)(Brilliant Blue G，BBG)顯著抑制，表明ATP引發(fā)的[Ca2+]i升高是通過活化P2X7受體通道。大黃酸(0.1，0.3，1，3，10μM)能劑量依賴性地抑制ATP引起的[Ca2+]i升高，提示大黃酸作用靶點是P2X7受體。
　　 (3)P2X7受體特異性激動劑BzATP（500μM）作為陽性對照，同樣可引發(fā)滑膜細(xì)胞[Ca2+]i升高，大黃酸能劑

5、量依賴性地抑制BzATP引起的[Ca2+]i升高，進(jìn)一步驗證大黃酸作用靶點是P2X7受體。
　　 (4)ATP(mM)刺激可顯著增加滑膜細(xì)胞內(nèi)氧自由基(ROS)的產(chǎn)生，大黃酸和BBG能劑量依賴性地抑制ROS的產(chǎn)生。
　　 (5)高濃度的ATP刺激滑膜細(xì)胞不能形成大孔，也不導(dǎo)致細(xì)胞的死亡。
　　 綜上所述，滑膜細(xì)胞上的P2X7通道在RA病理過程中發(fā)揮作用。通道活化引起胞內(nèi)[Ca2+]i升高以及ROS的產(chǎn)生，促進(jìn)炎癥