蛻皮甾酮在促進(jìn)3T3-L1脂肪細(xì)胞棕色基因表達(dá)中的作用.pdf

1、目的:通過(guò)誘導(dǎo)分化小鼠的3T3-L1前脂細(xì)胞，將其誘導(dǎo)成白色脂肪。給予不同濃度的蛻皮甾酮或羅格列酮，觀察各組細(xì)胞代謝水平的變化，以及探討其可能的機(jī)制。
　　方法:將小鼠的3T-L1前脂細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于含10％的胎牛血清中的高糖DMEM培養(yǎng)基中。取對(duì)數(shù)期的3T-L1前脂細(xì)胞接種于培養(yǎng)板上。待3T3-L1前脂細(xì)胞融合至70％左右時(shí)，給予含有3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(IBMX)0.5mmol/L、地塞米松1μmol/L、胰島素10μg/

2、ml的完全培養(yǎng)液2-4天，給予含有胰島素10μg/ml的高糖培養(yǎng)液2-4天，再給予高糖培養(yǎng)液4天。在培養(yǎng)液中加入蛻皮甾酮或羅格列酮共同孵育24小時(shí)，觀察各組細(xì)胞的葡萄糖的消耗量和各組細(xì)胞的甘油三脂(TG)的含量的變化，RT-PCR法檢測(cè)過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體PPARγ mRNA的含量，Western blot法檢測(cè)解偶聯(lián)蛋白1(UCP1)的含量。實(shí)驗(yàn)共分五組:(1)對(duì)照組:3T3-L1脂肪細(xì)胞;(2)蛻皮甾酮(ECR)組:分組為EC

3、R1×10-7組、ECR1×10-6組、ECR1×10-5組;(3)陽(yáng)性對(duì)照組:濃度為1×10-5mol/L的羅格列酮。
　　結(jié)果:ECR濃度＞1×10-4mol/L時(shí)，細(xì)胞OD值顯著降低(P＜0.01)，細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制;ECR濃度在1×10-7～1×10-5mo l/L時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)良好。與正常對(duì)照相比較，ECR在1×10-7～1×10-5mol/L濃度范圍的各組，白色脂肪細(xì)胞的葡萄糖消耗量增加，細(xì)胞內(nèi)的甘油三酯(TG)含量的減

4、少;與正常組相比較，ECR在1×10-7～1×10-5mol/L內(nèi)可以增加PPARγ基因的表達(dá)量，可以增加解偶聯(lián)蛋白1(UCP1)的表達(dá)。
　　結(jié)論:(1):ECR在濃度大于10-4mol/L時(shí)有明顯的細(xì)胞毒性，本實(shí)驗(yàn)ECR的濃度選擇為1×10-7mol/L-1×10-5mol/L。(2) ECR可以增加脂肪細(xì)胞的葡萄糖的消耗量，可以減少細(xì)胞內(nèi)TG的含量。(3) ECR可以增加白色脂肪中PPARγ mRNA的含量，增加UCP1的含