IVF周期血清總睪酮與卵巢反應(yīng)性參數(shù)及顆粒細(xì)胞FSHRmRNA表達(dá)的相關(guān)性研究及睪酮對(duì)體外培養(yǎng)人黃素化顆粒細(xì)胞.pdf

1、研究背景：
　　 在顆粒細(xì)胞內(nèi)，雄激素在FSH誘導(dǎo)的芳香化酶作用下轉(zhuǎn)化為雌激素。同時(shí)，雄激素又能增加顆粒細(xì)胞對(duì)FSH的敏感性，促進(jìn)卵泡發(fā)育，如：增加顆粒細(xì)胞FSH受體的表達(dá)，增加FSH對(duì)早期卵泡的募集，促進(jìn)胰島素樣生長(zhǎng)因子-Ⅰ的分泌，IGF-Ⅰ與FSH產(chǎn)生協(xié)同作用，促進(jìn)卵泡生長(zhǎng)發(fā)育。近年來(lái)，國(guó)外有些臨床研究在IVF周期前或周期過(guò)程中使用雄激素處理方案（雄激素啟動(dòng)，androgen priming），包括使用睪酮，脫氫表雄酮，黃體

2、生成素，人絨毛膜促性腺激素和芳香化酶抑制劑等，以提高體循環(huán)或卵巢局部的雄激素水平，希望增高的雄激素水平能增加卵巢對(duì)外源性促性腺激素的敏感性，增加卵巢反應(yīng)性，改善IVF結(jié)局。然而臨床研究結(jié)果并不完全一致。因此，我們?cè)O(shè)計(jì)了這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，觀察IVF過(guò)程中血清總睪酮的動(dòng)態(tài)變化、測(cè)定顆粒細(xì)胞FSHRmRNA的表達(dá)及不同濃度睪酮作用下顆粒細(xì)胞FSHRmRNA、IGF-ⅠmRNA、IGF-ⅡmRNA的表達(dá)，初探IVF周期雄激素處理方案改善卵巢反應(yīng)性的可行

3、性。
　　 研究目的：
　　 1了解IVF周期血清總睪酮與卵巢反應(yīng)性參數(shù)及IVF結(jié)局的關(guān)系；
　　 2分析IVF周期顆粒細(xì)胞FSHRmRNA表達(dá)與卵巢反應(yīng)性及血清總睪酮的關(guān)系；
　　 3睪酮對(duì)體外培養(yǎng)人黃素化顆粒細(xì)胞FSHRmRNA，IGF-ⅠmRNA，IGF-ⅠTmRNA基因表達(dá)的影響。
　　 研究方法：
　　 研究過(guò)程分為三部分進(jìn)行：
　　 第一部分：IVF常規(guī)長(zhǎng)方案患者進(jìn)入周

4、期后，監(jiān)測(cè)卵巢刺激過(guò)程中血清總睪酮濃度變化，記錄患者每次檢查時(shí)的卵泡數(shù)量及大小、血清性激素、取卵數(shù)、成熟卵數(shù)、優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)、囊胚數(shù)及奸娠情況及使用rFSH劑量、卵巢刺激天數(shù)。觀察卵巢刺激后血清總睪酮的濃度變化；分別以是否妊娠和血清基礎(chǔ)總睪酮分組，分析基礎(chǔ)總睪酮與卵巢反應(yīng)性及IVF結(jié)局的關(guān)系；探討血清總睪酮與卵巢反應(yīng)性參數(shù)的相關(guān)性。
　　 第二部分：IVF短方案患者進(jìn)入周期，臨床資料的獲取方法同第一部分。取卵同時(shí)，留取卵泡液，分離顆

5、粒細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄cDNA，進(jìn)行real-time PCR。按照獲得的成熟卵數(shù)將患者分為卵巢過(guò)度反應(yīng)組、正常反應(yīng)組和低反應(yīng)組。比較三組患者的一般情況、卵巢反應(yīng)性參數(shù)及妊娠率、囊胚冷凍率；比較三組血清總睪酮水平及顆粒細(xì)胞FSHRmRNA相對(duì)表達(dá)量，并對(duì)血清總睪酮、卵巢反應(yīng)性參數(shù)和FSHRmRNA相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行相關(guān)分析，進(jìn)一步探討血清總睪酮、FSHRmRNA表達(dá)與卵巢反應(yīng)性間的關(guān)系。
　　 第三部分：取卵時(shí)獲得人黃素化

6、顆粒細(xì)胞，以10-8mol/L、10-7mol/L、10-5mol/L濃度睪酮進(jìn)行刺激。各組分別在睪酮刺激6小時(shí)和24小時(shí)時(shí)終止培養(yǎng)，提取顆粒細(xì)胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄cDNA，進(jìn)行real-time PCR。以10-8mol/L作為對(duì)照組，比較不同濃度睪酮、刺激不同時(shí)間對(duì)顆粒細(xì)胞FSHRmRNA、IGF-ⅠmRNA、IGF-ⅡmRNA表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1第一部分
　　 ①卵巢刺激過(guò)程中，血清總睪酮濃度

7、隨著卵泡的發(fā)育逐漸上升；
　　 ②分別以血清基礎(chǔ)總睪酮（bTT）≤0.2 ng/ml和>0.2ng/ml將患者分組，兩組間卵巢反應(yīng)性參數(shù)及IVF結(jié)局比較均無(wú)顯著性差異；同樣方法再以bTT≤0.3ng/ml和>0.3ng/ml、bTT≤0.4ng/ml和>0.4ng/ml將患者分組，兩組間卵巢反應(yīng)性參數(shù)及IVF結(jié)局比較仍然均無(wú)顯著性差異；
　　 ③藥物刺激卵巢過(guò)程中的總睪酮濃度變化與基礎(chǔ)總睪酮濃度有平行關(guān)系；
　　

8、 ④血清基礎(chǔ)總睪酮與卵巢反應(yīng)性參數(shù)無(wú)線性相關(guān)關(guān)系；藥物刺激卵巢過(guò)程中，隨著卵泡發(fā)育，總睪酮水平與基礎(chǔ)竇卵泡數(shù)、取卵數(shù)、成熟卵泡數(shù)有正相關(guān)關(guān)系，與基礎(chǔ)FSH值和rFSH劑量有負(fù)相關(guān)關(guān)系；
　　 ⑤妊娠組OPU14日總睪酮值顯著高于未妊娠組。
　　 2第二部分
　　 ①按照卵巢反應(yīng)性分組研究發(fā)現(xiàn)：卵巢刺激過(guò)程中，卵巢對(duì)促件腺激素的反應(yīng)性與顆粒細(xì)胞FSHRmRNA的表達(dá)量有關(guān)，卵巢過(guò)度反應(yīng)組顆粒細(xì)胞FSHRmRNA表達(dá)

9、量顯著高于卵巢低反應(yīng)組顆粒細(xì)胞FSHRmRNA表達(dá)量；
　　 ②顆粒細(xì)胞FSHRmRNA表達(dá)量與rFSH用藥劑量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，與E2峰、取卵數(shù)呈正相關(guān)關(guān)系；
　　 ③血清基礎(chǔ)總睪酮與卵巢反應(yīng)性參數(shù)如rFSH劑量、卵巢刺激天數(shù)及E2無(wú)線性相關(guān)關(guān)系，與顆粒細(xì)胞FSHRmRNA的表達(dá)也無(wú)線性相關(guān)關(guān)系；藥物刺激卵巢過(guò)程中，隨著卵泡發(fā)育，動(dòng)態(tài)變化的總睪酮水平與rFSH劑量、卵巢刺激天數(shù)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系，與E2峰值、取卵數(shù)呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)

10、系，與FSHRmRNA的表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系。
　　 3第三部分
　　 ①不同濃度睪酮刺激顆粒細(xì)胞6小時(shí)，顯著增加顆粒細(xì)胞FSHRmRNA的表達(dá)，并呈現(xiàn)濃度依賴關(guān)系：睪酮濃度越高，基因表達(dá)量越高；刺激時(shí)間延長(zhǎng)至24小時(shí)，各組間顆粒細(xì)胞FSHRmRNA的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；
　　 ②不同濃度睪酮刺激顆粒細(xì)胞6小時(shí)，各組間顆粒細(xì)胞IGF-ImRNA的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；刺激時(shí)間延長(zhǎng)至24小時(shí)，顆粒細(xì)胞IGF-ImRNA的表

11、達(dá)顯著降低，并呈現(xiàn)濃度依賴關(guān)系：睪酮濃度越高，基因表達(dá)量越低；
　　 ③不同濃度睪酮刺激顆粒細(xì)胞6小時(shí)，各組間顆粒細(xì)胞IGF-IImRNA的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；刺激時(shí)間延長(zhǎng)至24小時(shí)，10-7mol/L處理組IGF-IImRNA基因表達(dá)量顯著高于10-8mol/L處理組和10-5mol/L處理組。
　　 結(jié)論：
　　 1基礎(chǔ)總睪酮水平在正常范圍內(nèi)的患者，其基礎(chǔ)總睪酮水平不能作為預(yù)測(cè)卵巢反應(yīng)性及IVF結(jié)局的指標(biāo)；