RNA干擾β-catenin對(duì)小鼠垂體生長(zhǎng)激素腺瘤細(xì)胞增殖和侵襲影響的研究.pdf

1、【背景】垂體腺瘤是鞍區(qū)常見腫瘤，為顱內(nèi)好發(fā)腫瘤之一，其發(fā)生率僅次于腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤和腦膜瘤。按照腫瘤生物學(xué)行為，垂體腺瘤分三類，即非侵襲性垂體腺瘤、侵襲性垂體腺瘤和垂體癌。其中，侵襲性垂體腺瘤的診斷及治療相對(duì)棘手，腫瘤常常侵犯周圍結(jié)構(gòu)如海綿竇、蝶篩竇、上斜坡、鞍底骨質(zhì)、硬腦膜等，且易發(fā)生垂體腺瘤卒中致病情危急。在治療上，侵襲性垂體腺瘤生長(zhǎng)迅速，手術(shù)全切困難，術(shù)后殘留率和復(fù)發(fā)率高，對(duì)化放療不敏感，預(yù)后較差，是臨床工作中極大的難題。垂體腺瘤的侵

2、襲進(jìn)展是一個(gè)多步驟、多環(huán)節(jié)的復(fù)雜過(guò)程，涉及多基因、多蛋白、多因素共同調(diào)控。目前對(duì)其具體機(jī)制尚不明確，有待進(jìn)一步研究。
　　β-鏈蛋白（β-catenin）是一種相對(duì)保守的多功能細(xì)胞骨架蛋白，對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)及穩(wěn)態(tài)極為重要，常表達(dá)于細(xì)胞膜連接、游離細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核等亞細(xì)胞區(qū)域，與鈣粘蛋白E-cadherin構(gòu)成重要的粘附結(jié)構(gòu)，調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附性。異常表達(dá)的β-catenin參與腫瘤侵襲遷移。研究發(fā)現(xiàn)，Wnt4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在垂體腺瘤的發(fā)生和發(fā)展

3、中起重要作用，β-catenin作為Wnt4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中關(guān)鍵下游蛋白，在垂體腺瘤中表達(dá)明顯升高，且其表達(dá)水平與腫瘤侵襲性明顯相關(guān)。
　　【目的】探討敲低β-catenin對(duì)小鼠垂體生長(zhǎng)激素腺瘤GT1.1細(xì)胞增殖及侵襲能力的影響及其相關(guān)機(jī)理。
　　【方法】本研究采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法，將β-catenin shRNA轉(zhuǎn)染小鼠垂體生長(zhǎng)激素腺瘤GT1.1細(xì)胞，下調(diào)β-catenin在細(xì)胞中的表達(dá)，構(gòu)建小鼠垂體生長(zhǎng)激素腺瘤GT1.1細(xì)胞

4、β-catenin體外敲低模型。同時(shí)設(shè)置control shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染對(duì)照組及未處理對(duì)照組。使用CCK-8法檢測(cè)β-catenin基因敲低后小鼠垂體生長(zhǎng)激素腺瘤GT1.1細(xì)胞的增殖力改變，Transwell法檢測(cè)β-catenin基因敲低后小鼠垂體生長(zhǎng)激素腺瘤GT1.1細(xì)胞的侵襲力改變。實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)各組細(xì)胞β-catenin、MMP2、MMP9的mRNA表達(dá)水平改變。蛋白免疫印跡（Western blot

5、）檢測(cè)各組細(xì)胞β-catenin、AKT、STAT3、CyclinD1、CDK4蛋白表達(dá)改變。通過(guò)明膠酶譜法檢測(cè)各組細(xì)胞胞內(nèi)MMP2和MMP9蛋白表達(dá)以及細(xì)胞外分泌的MMP2和MMP9蛋白變化。
　　【結(jié)果】轉(zhuǎn)染β-catenin shRNA可明顯降低小鼠垂體生長(zhǎng)激素腺瘤GT1.1細(xì)胞的β-catenin mRNA和蛋白表達(dá)水平。敲低小鼠垂體生長(zhǎng)激素腺瘤GT1.1細(xì)胞β-catenin基因，可抑制腫瘤細(xì)胞增殖和侵襲能力，并且β-c

6、atenin基因敲低后小鼠垂體生長(zhǎng)激素腺瘤GT1.1細(xì)胞的CDK4、CyclinD1、AKT、STAT3蛋白表達(dá)明顯降低，細(xì)胞表達(dá)和分泌MMP2和MMP9蛋白明顯下降。
　　【結(jié)論】通過(guò)轉(zhuǎn)染β-catenin shRNA，敲低小鼠垂體生長(zhǎng)激素腺瘤GT1.1細(xì)胞β-catenin基因，可明顯抑制β-catenin以及其下游基因AKT、STAT3、CyclinD1、CDK4、MMP2及MMP9蛋白表達(dá)，從而明顯抑制小鼠垂體腺瘤GT1.