rAAV1介導(dǎo)的自發(fā)性高血壓大鼠β1-AR過(guò)表達(dá)對(duì)美托洛爾降壓療效影響.pdf

1、目的：探討應(yīng)用rAAV1/CMV-Adrb1增加SHR心肌組織β1-AR表達(dá)對(duì)美托洛爾降壓療效的影響。
　　 方法：
　　 1.采用基因合成法獲得大鼠β1-AR基因開(kāi)放閱讀框全長(zhǎng)，構(gòu)建成pSNAV1/CMV-Adrb1質(zhì)粒，采用基因測(cè)序法對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行鑒定，對(duì)鑒定正確的pSNAV1/CMV-Adrb1進(jìn)行重組腺相關(guān)病毒rAAV1/CMV-Adrb1的包裝。
　　 2.實(shí)驗(yàn)對(duì)象為24只SHR，隨機(jī)選取6只作為rAA

2、V1/CMV-EGFP注射組，其余18只SHR隨機(jī)分成3組：rAAV1/CMV-Adrb1+美托洛爾組6只、假手術(shù)+美托洛爾組6只、假手術(shù)+生理鹽水組6只，美托洛爾組給予25mg/kg/次灌胃并每周監(jiān)測(cè)SHR血壓水平，干預(yù)4周后處死大鼠并取心肌組織。
　　 3.采用RT-PCR和Real-time RT-PCR法檢測(cè)β1-AR基因mRNA在SHR心肌組織中的表達(dá)；采用免疫組化和Western-blot法檢測(cè)β1-AR蛋白的含量。

3、
　　 結(jié)果：
　　 1.病毒載體構(gòu)建及鑒定：基因測(cè)序證實(shí)pSNAV1/CMV-Adrb1構(gòu)建成功，rAAV1/CMV-Adrb1病毒滴度為2.0×1012v.g./mL。
　　 2.各組SHRβ1-AR表達(dá)比較：RT-PCR和Real-time RT-PCR結(jié)果顯示，rAAV1/CMV-Adrb1注射后β1-AR mRNA表達(dá)顯著高于假手術(shù)組(0.587±0.132 vs.0.212±0.075，P<0.05)

4、；免疫組化和Western-blot結(jié)果顯示，rAAV1/CMV-Adrb1注射組β1-AR蛋白表達(dá)顯著高于假手術(shù)組(0.545±0.119 vs.0.421±0.136，P<0.05)。
　　 3.各組SHR降壓療效比較：干預(yù)4周后，rAAV1/CMV-Adrb1+美托洛爾組和假手術(shù)+美托洛爾組收縮壓顯著低于假手術(shù)+生理鹽水組(176.2±8.5mmHg vs.182.5±4.5mmHg vs.198.7±7.0 mmHg，P