梅花鹿血酶解制備抗氧化活性多肽及其抗衰老功能的研究.pdf

1、梅花鹿血是一種傳統(tǒng)名貴中藥。本論文首先分析了梅花鹿血中的主要化學成分；其次，對酶解梅花鹿血制備抗氧化活性多肽的條件進行了優(yōu)化研究，并對抗氧化活性多肽進行分離純化和定性分析；最后，對抗氧化活性多肽的抗衰老功能進行了動物試驗研究。 梅花鹿血的化學成分分析表明，梅花鹿血中水分含量為81.09％；灰分含量為3.17％；脂肪含量為0.59％；蛋白含量為14.99％；棕櫚酸含量為1.65mg/g，硬脂酸含量為0.35mg/g，油酸含量為0.

2、69 mg/g，亞油酸含量為0.98 mg/g，亞麻酸含量為0.87 mg/g；梅花鹿血蛋白中含有17種氨基酸，其中Lcu和Asp的質量分數(shù)較高，分別為14.90％和10.99％，其中人體必需氨基酸(Val、Ile、Leu、Phe、Met、Thr、Lys)占氨基酸總量的44.72％。 通過單因素試驗和正交試驗優(yōu)化酶解條件，綜合考慮水解度和酶解產物對自由基的清除率，結果表明胰蛋白酶優(yōu)于AS1.398中性蛋白酶。確定胰蛋白酶酶解制備

3、抗氧化活性多肽最佳條件為：酶濃度(酶：蛋白)為8％，底物濃度(鹿血：水)為1：3，pH值為7.3，酶解時間為4小時，酶解溫度為56℃；極差值反映出影響水解度和酶解產物對自由基清除能力的各因素排列順序均為：pH值>溫度>底物濃度>酶濃度>時間；此條件下的酶解產物對超氧陰離子自由基和羥基自由基清除率分別可達91.63％和94.32％，水解度為44.32％。 酶解產物經SephadexG-25和DEAE-52纖維素柱層析純化，得到帶有

4、較弱負電荷的抗氧化活性多肽；經高效液相色譜分析，該抗氧化活性多肽主要是以分子量為876Da，463Da，146Da的混合肽；氨基酸組成分析表明，純化后的抗氧化活性多肽含有17種氨基酸，其中Leu和Lys的質量分數(shù)較高，分別達到17.16％和12.34％，人體必需氨基酸(Val、Ile、Leu、Phe、Met、Thr、Lvs)的含量高達52.74％。 動物抗衰老試驗表明，所制備的抗氧化活性多肽可以明顯減緩D一半乳搪所導致的大鼠衰老