酶法制備櫻桃籽抗氧化多肽的研究.pdf

1、伴隨著櫻桃加工業(yè)的快速發(fā)展，加工副產(chǎn)物——櫻桃籽造成的環(huán)境污染、資源浪費(fèi)問(wèn)題日益凸顯，其深加工和綜合利用引起重視。櫻桃籽富含多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，其中蛋白質(zhì)占其干重的30-40％，是生產(chǎn)抗氧化多肽的良好原料。本研究以櫻桃籽蛋白為原料，應(yīng)用生物技術(shù)、食品高新技術(shù)、分離純化技術(shù)、現(xiàn)代儀器分析技術(shù)等先進(jìn)技術(shù)，制備獲得兩種抗氧化能力較強(qiáng)的多肽，獲得主要研究成果如下:
　　1、以酶解產(chǎn)物的多肽得率和水解度為指標(biāo)，確定了堿性蛋白酶和中性蛋白酶雙酶法協(xié)

2、同水解的復(fù)配工藝。通過(guò)單因素試驗(yàn)、Plackett-Burman試驗(yàn)、Box-Behnken設(shè)計(jì)響應(yīng)面分析試驗(yàn)確定了最優(yōu)酶解工藝參數(shù)為:料液比3.82％，加酶量4823U/g，酶配比1∶1，pH7.5，溫度48.77℃，時(shí)間128min，在此工藝下獲得的多肽得率為41.90％。
　　2、采用超濾、葡聚糖凝膠過(guò)濾層析、半制備反相高效液相色譜對(duì)櫻桃籽蛋白酶解產(chǎn)物進(jìn)行分離純化，通過(guò)對(duì)各分離組分的羥基自由基、超氧陰離子自由基、DPPH自由

3、基、ABTS陽(yáng)離子自由基清除能力的測(cè)定，得到了自由基清除能力較高的肽段F-IV-E(a)-4和F-IV-E(a)-5，其中在5mg/mL的濃度下，E(a)-4具有較高的DPPH自由基清除率，同時(shí)E(a)-5具有較高的超氧陰離子自由基清除率。
　　3、應(yīng)用Q-TOF-MS和494蛋白質(zhì)序列分析儀鑒定兩條肽段F-IV-E(a)-4和F-IV-E(a)-5的相對(duì)分子量和氨基酸序列分別為731.92 Da[M+H]+(Phe-Pro-Gl