艾灸燃煙自由基及其生物活性研究.pdf

1、艾灸是中國傳統(tǒng)醫(yī)學的瑰寶，其將艾葉卷制成艾條，暗火燃燒，在人體的穴位上灸之，產生熱作用、藥性作用與光輻射作用的綜合效應，共同通過作用于人體的經絡腧穴，達到治病和保健目的的一種外治方法。關于藥性作用的研究，人們普遍集中于艾葉與艾煙穩(wěn)定化學成分研究，對艾煙中不穩(wěn)定物質如自由基研究較少，已有研究表明自由基既有生理作用同時也具有一定的病理作用。所以能從自由基角度去分析艾灸的安全性與有效性是應該是非常有意義的。
　　本論文以艾灸燃煙為研究對

2、象，檢測艾葉燃煙中活性自由基，從自由基的角度來分析艾灸的安全性；同時找到了研究自由基生物活性的方法，以對苯二酚在堿性條件下再現(xiàn)自由基分析其抑菌活性，為艾灸燃煙為何用于室內空氣消毒提供了理論依據(jù)。并采用微波法合成了艾煙中發(fā)現(xiàn)的5-叔丁基連苯三酚，為后續(xù)研究提供原材料。研究的主要工作如下：
　　1、DPPH(1，1-二苯基-2-苦基肼自由基)是一種穩(wěn)定的自由基，在甲醇溶液中溶解度較好，顏色呈現(xiàn)深紫色。當抗自由基物質與DPPH發(fā)生作用，

3、其顏色就會變淺，可通過分光光度計測量其變化程度，從而間接判斷抗自由基物質的含量。本章就是采用分光光度法，分別比較艾灸燃煙與艾灸燃煙中穩(wěn)定物質對DPPH自由基的作用，通過兩者紫外吸光度差值來間接說明艾灸燃煙自由基的存在，同時比較不同儲藏期的艾灸燃煙自由基濃度的變化。結果發(fā)現(xiàn)艾灸燃煙中清除DPPH自由基的成分既有穩(wěn)定的化學物質，也有不穩(wěn)定的自由基，隨著儲藏期的延長，自由基濃度減少。其中1年艾葉燃煙中自由基含量最高，3年與5年艾葉燃煙中自由基

4、含量相當，3年比5年稍微高一些。這是因為隨著儲藏期的延長，艾葉中揮發(fā)油會減少，而揮發(fā)油經高溫裂解可生成多種活性自由基，所以1年艾葉燃煙中含自由基最多，5年艾葉燃煙含量最少。艾灸燃煙自由基的存在與其濃度隨儲藏期變化可以更進一步地闡釋艾灸的生物活性與安全性。
　　2、艾煙常用于室內的空氣消毒，其效果還比較好，我們猜這其中起作用應不止是艾煙中穩(wěn)定的化合物，還有艾煙中不穩(wěn)定的物質如自由基，所以本章就探究了自由基對細菌的作用效果。本章實驗內

5、容是應用電子自旋共振（ESR）驗證對苯二酚在堿性條件下產生的半醌自由基，并應用HPLC法檢測對苯二酚在堿性條件下的反應產物；應用打孔法，研究對苯二酚在堿性條件下對BL21大腸桿菌、MRSA、MSSA3種菌的抑菌作用，并采用了96孔板法研究其對這3種菌的最小抑菌濃度（MIC）；同時通過測量這3種細菌的生長曲線來比較對苯二酚在PH=7.5與PH=6條件下的抑菌活性，及其對MRSA、BL21大腸桿菌、MSSA3種菌的抑菌活性。結果為ESR檢測

6、到對苯二酚在堿性條件下產生半醌自由基，半衰期較長，其抑菌作用較對苯二酚和對苯二酚在堿性條件下放置2天后產生的最終產物都強；對苯二酚在堿性條件下的抑菌作用遠遠強于其在中性或者偏酸性條件下，說明半醌自由基參與了抑菌作用且是活性較高的物質。
　　3、5-叔丁基連苯三酚是從艾煙中分離出的一種代表性的酚類物質，本課題組已分析了其抗菌作用，但是關于此化合物的來源，只發(fā)現(xiàn)一篇文獻報道了此化合物的合成，且合成步驟繁瑣，收率不高，因此為了后續(xù)課題組