新型生物自由基檢測技術(shù).pdf

1、近年來,由于活性氧(reactive oxygen species,ROS)引起的DNA、蛋白質(zhì)等生物大分子的氧化損傷在基因突變、癌癥和衰老等生物過程中起到重要作用,受到了廣泛的關(guān)注。因此,對ROS引起的DNA和蛋白質(zhì)等生物大分子氧化損傷的檢測就顯得尤為重要。目前的檢測方法雖然靈敏,但耗時、費(fèi)力并且耗費(fèi)大。在本研究中,我們開發(fā)了一種簡單,快速,無標(biāo)記的金納米粒子比色法研究單鏈DNA(single-stranded DNA,ssDNA)損

2、傷的過程。此外,合成具有高效自由基捕獲能力的自旋捕捉探針,以期用于檢測ROS引起的生物大分子自由基生成。本論文的主要研究工作如下:
　　 1.采用無標(biāo)記金納米顆粒做為指示劑,開發(fā)了一種可以肉眼可視的ssDNA損傷的比色檢測新方法。該方法基于不同長度的ssDNA在納米金顆粒上的吸附速率不同的原理,通過控制ssDNA對AuNPs的吸附時間來考察ssDNA斷裂時DNA鏈長的變化。當(dāng)AuNPs與不同長度的ssDNA在限定的時間內(nèi)進(jìn)行孵育

3、,短的ssDNA和長的ssDNA在AuNPs上的吸附量會存在差異,從而導(dǎo)致不同長度ssDNA與AuNPs的復(fù)合物在鹽溶液中的穩(wěn)定性差異。這種穩(wěn)定性差異將引起金納米顆粒溶液顏色的改變,最終可用于直觀的表明ssDNA的損傷效應(yīng)。這種比色法能夠快速檢測ssDNA的酶切反應(yīng)及由自由基引起ssDNA的氧化損傷,并可用于核酸酶抑制效應(yīng)以及抗氧化效應(yīng)的檢測,證明了該體系在新型核酸酶抑制劑的鑒定以及天然產(chǎn)物或藥物的抗氧化性篩選上具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。