rhBMP7對原發(fā)性開角型青光眼小梁網(wǎng)細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的:建立原發(fā)性開角型青光眼(Primary open angle glaucoma,POAG)小梁網(wǎng)細(xì)胞體外原代培養(yǎng)體系;分析不同終濃度重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白7(Recombination human bone morphogenetic protein,rhBMP7)對POAG小梁網(wǎng)細(xì)胞增殖的影響;探討rhBMP7與POAG發(fā)生、進(jìn)展的相關(guān)性。
　　方法:取臨床確診為POAG的患者,行小梁切除術(shù)(術(shù)中未使用絲裂霉素),切除的含小

2、梁網(wǎng)組織的深層鞏膜組織塊,運(yùn)用組織塊培養(yǎng)法,進(jìn)行體外POAG小梁網(wǎng)細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng),將傳3代POAG小梁網(wǎng)細(xì)胞,通過倒置顯微鏡、免疫細(xì)胞化學(xué)等方法觀察體外培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)、生長特性及生物學(xué)特征等,鑒定體外培養(yǎng)細(xì)胞類型;將終濃度為0ng/ml(對照組)、20ng/ml、50ng/ml、80ng/ml、100ng/ml、200ng/ml的rhBMP7無血清培養(yǎng)基,處理傳3代POAG小梁網(wǎng)細(xì)胞及經(jīng)CFDASE標(biāo)記的傳3代POAG小梁網(wǎng)細(xì)胞,采用

3、CCK8法、熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀等方法,檢測不同終濃度rhBMP7的無血清培養(yǎng)基對POAG小梁網(wǎng)細(xì)胞增殖的影響。
　　結(jié)果:1.組織塊貼壁約10天左右,可見細(xì)胞從其邊緣爬出,呈圓形、梭形、多角形等,通過細(xì)胞傳代培養(yǎng)、倒置顯微鏡觀察、免疫細(xì)胞化學(xué)抗原表達(dá)檢測,證實(shí)體外培養(yǎng)細(xì)胞為POAG小梁網(wǎng)細(xì)胞;
　　2.運(yùn)用CCK8法檢測發(fā)現(xiàn):經(jīng)終濃度為0ng/ml(對照組)、20ng/ml、50ng/ml、80ng/ml、100ng/m

4、l、200ng/ml的rhBMP7無血清培養(yǎng)基處理后,POAG小梁網(wǎng)細(xì)胞吸光度(OD值)分別為:0.5612±0.0269、0.7242±0.0393、1.4160±0.0162、1.7404±0.0392、1.8538±0.0145、1.9364±0.0546;實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖率分別為1.37％、2.96%、3.70%、3.96%、4.15%;實(shí)驗(yàn)組與對照組之間及各實(shí)驗(yàn)組之間增殖差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P<0.05;
　　3.熒光顯微鏡

5、觀察示:經(jīng)CFDASE標(biāo)記的POAG小梁網(wǎng)細(xì)胞,隨著rhBMP7終濃度的增加,細(xì)胞量及密度增加,且熒光染色逐漸減弱;
　　4.采用流式細(xì)胞儀檢測經(jīng)0ng/ml(對照組)、20ng/ml、50ng/ml、80ng/ml、100ng/ml、200ng/ml終濃度rhBMP7無血清培養(yǎng)基干預(yù)的POAG小梁網(wǎng)細(xì)胞,與0ng/ml(對照組)相比,各處理組分裂、增殖細(xì)胞所占比例分別為:17.85%、18.63%、20.10%、27.45%、7