基于蛋白質(zhì)組學(xué)的肺炎支原體耐藥機制調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的探索研究.pdf

1、目的:肺炎支原體(Mp)是社區(qū)獲得性肺炎(CAP)最常見致病原之一，目前世界范圍內(nèi)Mp對大環(huán)內(nèi)酯類藥物的耐藥形勢日趨嚴峻，但對其耐藥機制的深入研究還很少，多數(shù)研究只是針對基因水平上藥物結(jié)合位點的突變檢測以及流行病學(xué)方面的調(diào)查。本研究擬從蛋白質(zhì)水平探討Mp對大環(huán)內(nèi)酯類的耐藥機制，以期能鑒定注釋新的耐藥相關(guān)蛋白，并探討其相關(guān)的基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。
　　方法:對Mp臨床分離株進行大環(huán)內(nèi)酯類的藥物敏感性測定。應(yīng)用基于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-M

2、S/MS)的iTRAQ定量蛋白質(zhì)組組學(xué)技術(shù)，對高MIC的臨床耐藥株和敏感株進行高通量蛋白質(zhì)測序及鑒定。運用比較蛋白質(zhì)組學(xué)原理，以敏感株為對照，找出2株臨床耐藥株共有的差異蛋白。再對這些差異蛋白進行包括GO、COG、KEGG、富集分析等的生物信息學(xué)分析，然后在大樣本的Mp菌株中，對目標(biāo)差異蛋白進行RT-PCR驗證，最終確定可能與耐藥相關(guān)的潛在蛋白。
　　結(jié)果:本研究共鑒定出蛋白496種。敏感株FH和耐藥株S20比較差異表達蛋白為10

3、種;敏感株FH和耐藥株S56比較差異表達蛋白有18種。這兩個比較組共有的差異蛋白為7種，且這7種蛋白無一出現(xiàn)在S20和S56比較組的差異蛋白中。通過生物信息學(xué)分析，確定了這些蛋白的分子功能和參與的代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，并進行富集分析，但未發(fā)現(xiàn)這7種差異蛋白與其他的大環(huán)內(nèi)酯類耐藥機制相關(guān)。對上述菌體差異蛋白，在53株Mp樣本中進行RT-PCR驗證，發(fā)現(xiàn)差異蛋白MPN480、MPN277的編碼基因在紅霉素耐藥菌株中的表達量較敏感株組同樣顯著上調(diào)。<