缺氧誘導因子HIF-2a對NCI-H226細胞生物學行為的影響.pdf

1、目的：
　　腫瘤細胞在快速生長時，血液的供養(yǎng)就會降低，當缺氧達到3％的時候，就會誘發(fā)缺氧微環(huán)境，產(chǎn)生一種叫缺氧誘導因子(hypoxia-inducible factors，HIFs)的介導來保護機體應(yīng)激反應(yīng)，缺氧所造成的一系列反應(yīng)過程和很多惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。通過探討HIF-2a的表達是否對肺癌細胞（人肺鱗癌細胞系NCI-H226細胞株）增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等方面產(chǎn)生影響，從而發(fā)現(xiàn)靶向抑制HIF-2a對NSCLC可能的治療作用

2、。
　　方法：
　　1、HIF-2a-shRNA干擾質(zhì)粒的構(gòu)建及篩選，實驗采用脂質(zhì)體（Lipofect emin2000）將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染NCI-H226細胞，建立陽性組（HIF-2a干擾質(zhì)粒組）和陰性對照組（空質(zhì)粒組），放入細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24h，用綠色熒光顯微鏡觀察并拍照，計算轉(zhuǎn)染效率，提取蛋白用Western Blot蛋白印跡法驗證HIF-2a表達的抑制效果。
　　2、建立人肺癌細胞系NCI-H226細胞不同時相段

3、缺氧培養(yǎng)模型，誘導HIF-2a表達，用Wes tern Blot蛋白印跡法驗證NCI-H226中HIF-2a的表達情況。
　　3、HIF-2a對NCI-H226細胞生物學行為的影響（MTT法檢測細胞增殖情況，Transwell和細胞劃痕實驗觀察細胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力）。
　　結(jié)果：
　　1、成功構(gòu)建的shRNA HIF-2表達載體。
　　2、缺氧條件下NCI-H226細胞表達HIF-2a。
　　3、抑制HIF-