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文檔簡介
1、第一部分新生兒膿毒癥miRNAs表達譜及其對免疫應答基因和蛋白的調(diào)節(jié)
目的:miRNAs在免疫系統(tǒng)的異常表達可能在抗感染免疫應答中發(fā)揮關(guān)鍵的作用,并且參與到膿毒癥的免疫調(diào)節(jié)過程中。本研究的目的在于探索miRNAs在新生兒膿毒癥的免疫應答調(diào)控中的重要作用。
方法:首先,我們采用微陣列技術(shù)檢測了來自膿毒癥新生兒和非感染新生兒的外周血白細胞的miRNAs表達譜。然后,基于靶基因預測的方法,我們從這些差異表達的miRNAs中
2、挑選出26個免疫相關(guān)的miRNAs,采用熒光定量PCR的方法進行進一步的檢測。同時,我們運用了PCR Array及蛋白芯片技術(shù)分別對這些新生兒白細胞免疫應答基因的表達譜和血漿中的免疫及炎癥相關(guān)細胞因子進行了定量檢測,以探尋這些顯著變化的miRNAs對新生兒膿毒癥免疫應答的調(diào)節(jié)作用。
結(jié)果:與非感染新生兒相比,膿毒癥新生兒中的10個免疫調(diào)控miRNAs在表達量上出現(xiàn)了2倍以上的明顯變化。而11個免疫應答基因及15個血漿細胞因子或
3、受體也在膿毒癥新生兒中出現(xiàn)明顯的上調(diào)或下調(diào)。綜合分析結(jié)果表明,這些異常表達的miRNAs對新生兒膿毒癥免疫應答和炎癥反應的調(diào)節(jié)以負向和抑制反應占優(yōu)勢。
結(jié)論:我們的研究證明在新生兒膿毒癥中存在某些miRNAs表達水平的異常,這些顯著變化的miRNAs很可能參與了新生兒膿毒癥免疫應答的調(diào)控,所表現(xiàn)出的新生兒炎癥反應的特點與其免疫功能的不成熟有關(guān)。
第二部分 LPS誘導的臍血白細胞miRNAs表達譜和對TLR通路的調(diào)節(jié)及
4、其與成人的差異
目的:為進一步證實miRNAs在新生兒抗感染免疫和炎癥反應中的作用。本研究通過體外細胞培養(yǎng),檢測LPS誘導的臍血白細胞miRNAs表達譜變化,探討miRNAs在新生兒固有免疫,尤其是在TLR信號通路中的調(diào)控作用,同時比較臍血白細胞與成人外周血白細胞miRNAs對LPS刺激的應答差異,以進一步探討新生兒對感染的易感機制。
方法:采集臍血和成人外周血標本進行體外全血細胞培養(yǎng),在加入LPS刺激2h后收獲和分
5、離白細胞,抽提總RNA,應用微陣列技術(shù)和PCR Array分別檢測LPS誘導的miRNAs和TLR相關(guān)基因的表達譜。運用生物信息學方法分析這些miRNAs可能參與調(diào)控的生物過程,及其作用于TLR信號通路的靶基因。
結(jié)果:臍血白細胞經(jīng)LPS誘導后(與未刺激細胞相比)共有85個miRNAs及41個TLR相關(guān)基因被檢測到有差異表達的現(xiàn)象;與LPS刺激的成人外周血白細胞相比,共有53個miRNAs及29個TLR相關(guān)基因差異表達。生物信
6、息學分析發(fā)現(xiàn),LPS誘導臍血白細胞(與未刺激細胞相比)上調(diào)和下調(diào)的這些miRNAs的靶基因共同參與到細胞生物合成過程,基因表達,大分子生物合成過程等的調(diào)控中;而與LPS刺激的成人外周血白細胞相比上調(diào)和下調(diào)的miRNAs的靶基因分別在細胞蛋白質(zhì)代謝過程和高分子代謝過程的負調(diào)控等生物過程存在差異。LPS誘導臍血白細胞(與未刺激細胞相比)產(chǎn)生的11個差異表達的TLR信號通路基因的cDNA序列中,我們發(fā)現(xiàn)了13個潛在的miRNA-mRNA相互作
7、用位點;而與LPS刺激的成人外周血白細胞相比產(chǎn)生的10個差異表達的TLR信號通路基因則接受12個差異表達的miRNAs的調(diào)控。
結(jié)論:我們的體外細胞培養(yǎng)研究證實,在細菌內(nèi)毒素LPS誘導的急性炎癥反應中miRNAs表達譜發(fā)生了顯著的變化,并且臍血白細胞與成人白細胞的miRNAs表達譜存在明顯差異。這些miRNAs調(diào)控的預測靶基因參與多個重要的生物過程。LPS誘導的miRNAs對TLR信號通路可能發(fā)揮重要的免疫調(diào)控作用,并且這種調(diào)
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