深低溫對全腦缺血性損傷保護(hù)機(jī)制的基因組學(xué)研究.pdf

1、本文論述了深低溫對全腦缺血性損傷保護(hù)機(jī)制的基因組學(xué)研究。 國際醫(yī)學(xué)界把低溫劃分為輕度低溫33-35oC，中度低溫28-32 oC，深度低溫17-27 oC和超深度低溫2-16 oC。大量動物試驗(yàn)和臨床實(shí)踐證實(shí)低溫具有顯著的腦保護(hù)作用，但隨著溫度的降低，副作用也會逐步增加。輕中度低溫由于副作用小，目前在臨床上已經(jīng)得到了廣泛的運(yùn)用。但臨床上還有許多病理生理狀態(tài)不能僅靠輕中度低溫解決問題。目前國內(nèi)外已經(jīng)有大量的試驗(yàn)證實(shí)深低溫對全腦缺血

2、缺血性損傷具有更好的保護(hù)作用，它能明顯增加腦組織對缺血的耐受性，并且深低溫腦保護(hù)技術(shù)已經(jīng)開始用于臨床。關(guān)于低溫腦保護(hù)作用機(jī)制，國內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)作了較多的研究。但目前對低溫腦保護(hù)相關(guān)基因尚缺乏足夠的認(rèn)識。 本試驗(yàn)應(yīng)用基因組學(xué)技術(shù)研究全腦缺血大鼠海馬基因表達(dá)變化以及深低溫對全腦缺血大鼠海馬基因表達(dá)的影響，篩選出深低溫腦保護(hù)相關(guān)基因，為今后更為系統(tǒng)全面的分析闡明低溫腦保護(hù)機(jī)理奠定科學(xué)基礎(chǔ)。 第一部分大鼠全腦缺血早期海馬基因表達(dá)

3、譜的變化。 目的：篩選出全腦缺血大鼠海馬差異表達(dá)基因。 方法：建立大鼠體外循環(huán)模型，實(shí)驗(yàn)分成兩組，對照組(n=3)：建立體外循環(huán)5分鐘后取大鼠海馬組織；實(shí)驗(yàn)組(n=3)：停循環(huán)全腦缺血5分鐘后取大鼠海馬組織。采用Affymetrix 大鼠全基因組芯片檢測兩組動物海馬基因表達(dá)的變化，獲取差異表達(dá)基因。 結(jié)果：篩選出差異表達(dá)基因共有55個(gè)，其中28個(gè)基因表達(dá)有顯著性差異（P<0.01），上調(diào)30個(gè)，下調(diào)25個(gè)。

4、 結(jié)論：篩選出的全腦缺血大鼠海馬差異表達(dá)基因?qū)﹃U明全腦缺血性損傷的分子生物學(xué)機(jī)制有重要意義。 第二部分深低溫對全腦缺血大鼠海馬基因組表達(dá)的影響。 目的：篩選出深低溫對全腦缺血大鼠海馬影響的差異表達(dá)基因。 方法：建立大鼠體外循環(huán)模型，實(shí)驗(yàn)分成兩組，常溫缺血組(n=3)：常溫條件下停循環(huán)全腦缺血5分鐘；低溫缺血組(n=3)：深低溫條件下停循環(huán)全腦缺血5分鐘。采用Affymetrix 大鼠全基因組芯片檢測

5、兩組動物海馬基因表達(dá)的變化，獲取差異表達(dá)基因。 結(jié)果：篩選出差異表達(dá)基因共有75個(gè)，其中39個(gè)基因表達(dá)有顯著性差異（P<0.01），上調(diào)33個(gè)，下調(diào)42個(gè)。 結(jié)論：深低溫對全腦缺血大鼠海馬基因表達(dá)有明顯影響，這些差異表達(dá)基因可能與深低溫腦保護(hù)作用相關(guān)。 第三部分深低溫對全腦缺血大鼠海馬mGluR3表達(dá)的影響。 目的：研究深低溫對全腦缺血大鼠海馬代謝型谷氨酸受體3型(mGluR3)表達(dá)的影響，并探討其在深

6、低溫腦保護(hù)機(jī)制中的作用。 方法：建立大鼠體外循環(huán)模型，實(shí)驗(yàn)分成3組，對照組(n=6)：建立大鼠體外循環(huán)模型5分鐘后取海馬組織；常溫缺血組(n=6)：常溫條件下停循環(huán)全腦缺血5分鐘；低溫缺血組(n=6)：深低溫條件下停循環(huán)全腦缺血5分鐘。采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測3組動物海馬mGluR3的表達(dá)。 結(jié)果：常溫缺血組目的基因的表達(dá)值比對照組明顯下調(diào)， p＜0.01,有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；低溫缺血組目的基因的表達(dá)值比對照