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文檔簡介
1、人類白細胞抗原(HLA)在抗原遞呈及細胞毒性T淋巴細胞(CTL)對病毒感染細胞及腫瘤細胞的識別過程中起關鍵作用。病毒感染細胞后,通過抗原遞呈途徑最終和HLA I類分子形成病毒抗原肽/HLAI類分子復合物表達下細胞表面,進而被特異性的CTL識別并殺傷。為了逃避這種殺傷,有報道某些病毒可以采取一系列的策略干擾抗原遞呈,調(diào)控HLA I類復合物的表達,導致病毒逃避機體的抗感染免疫。乙型肝炎病毒感染為全球重要健康問題之一,大約有3億5干萬慢性感染
2、人口,每年死于HBV感染的人數(shù)達1百萬。我國HBV感染人群比例更大,估計占總人口的10%。HBV感染可出現(xiàn)多種臨床表現(xiàn),包括急性、慢性、重型肝炎,可發(fā)展為肝硬化、肝癌,最終常因肝衰竭或肝癌而死亡。我國原發(fā)性肝癌患者HBV感染率高達90%,HBV感染者發(fā)生肝癌的概率較無HBV感染者高數(shù)十倍。已有報道及本實驗室前期研究中發(fā)現(xiàn)肝癌中HLA I類分子表達較癌旁增加,但其機制及意義需進一步研究。 本實驗室對肝癌中HLA I類分子表達上調(diào)的
3、機制已在多水平作了研究。本研究著重探討肝癌中乙型盯炎病毒(HBV)對HLAI類分子表達影響及其可能的機制。 應用 PCR 檢測肝癌組織和肝癌細胞系,HBV 感染情況,流式細胞儀技術、RT-PCR 檢測肝癌細胞系HepG2 和HBV細胞模型HepG2.2.15(含雙拷貝的HBV全長DNA)HLA I類分子復合物和轉錄水平的表達;構建HBV真核表達質粒,轉染肝痛細胞系,ELISA檢測轉染細胞HBV抗原分泌情況,RT-PCR、West
4、ern Blot、流式細胞儀分析HLA I類分子在轉錄水平、蛋白質水平及細胞表面復合物水平的變化。研究結果表明: 1、應用PCR檢測及臨床資料顯示肝癌組織標本90%以上存在HBV的感染,而在肝癌細胞系中檢測不到HBV<,x>基因。選擇肝癌細胞系HepG2 和HBV細胞模型HepG2.2.15為研究對象,應用流式細胞儀和RT-PCR檢測,發(fā)現(xiàn)細胞表而HLA I類復合物和HLA I類抗原加工遞呈相關分子表達均無變化。 2、構
5、建了HBV真核表達質粒含HBV全基因組的pcDNA3.1-BV1.0和含1.2拷貝HBV全基因組的pcDNA3.1-HBV1.2,轉染肝癌細胞系BEL7405后,ELISA檢測HBV抗原的分泌,前者HBsAg為弱陽性,HReAg OD值較低,呈低表達或不表達;后者HBsAg分泌呈強陽性,HBeAg呈弱陽性。利用流式細胞儀檢測轉染后BEL7405細胞表面的HLA I類復合物的表達,相對于對照空載體,兩個含HBV全基因組的重紕質粒均能增加細
6、胞HLA I類復合物的表達,而且pcDNA3.1-HBV1.2較pcDNA3.1-HBV1.0增加的更為顯著。RT-PCR和Western Blot檢測轉染后BEL7405細胞中HLA I類分子及加工遞呈相關分子表達情況,發(fā)現(xiàn)細胞中TAP I分子增加顯。 3、表達質粒pcDNA3.1-HBV1.2轉染入肝癌細胞系BEL7405后,上調(diào)細胞表面HLA I類復合物,MTT檢測顯示NK92細胞對其殺傷活性受到一定程度的抑制。
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