炎性骨關(guān)節(jié)損傷大鼠血清、滑膜中炎性通路相關(guān)細胞因子的表達和干預研究.pdf

1、目的：競技體育比賽充滿了激烈的對抗與競爭，在多種運動項目中，運動員由于某一次動作幅度過大或長時間大強度訓練導致踝關(guān)節(jié)軟組織疲勞或損傷，可能引起關(guān)節(jié)方面的病變，并且短時間內(nèi)難以恢復，嚴重的甚至造成終身殘疾，極大的影響了運動員的運動壽命和生活質(zhì)量。關(guān)節(jié)發(fā)生炎性病變是關(guān)節(jié)損傷的一大重要原因，而細胞內(nèi)鈣離子超載已經(jīng)被證實與眾多炎性細胞的激活，以及相關(guān)酶、炎性因子的釋放有極大關(guān)聯(lián)，因此我們可以通過鈣通道拮抗劑來抑制炎性損傷的發(fā)生。在現(xiàn)階段的研究中

2、，我們試圖探討炎性骨關(guān)節(jié)損傷可能的分子機制，以及從虎紋捕鳥蜘蛛毒液中提取的蛋白毒素—HWTX—Ⅰ，作為一種新型鈣通道拮抗劑，在大鼠佐劑性關(guān)節(jié)損傷模型中的抗傷害效應，為運動性關(guān)節(jié)損傷新的有效治療手段提供實驗依據(jù)。 方法：5—6周齡健康雄性SD大鼠64只，隨機分為實驗對照組（n=16）、非用藥組（n=16）、HWTX—Ⅰ用藥組（n=16）、布洛芬用藥組（n=16），采用踝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射完全弗氏佐劑制作大鼠佐劑性關(guān)節(jié)損傷模型，采用本課題

3、組建立的大鼠硬脊膜外腔置管手術(shù)方法，利用相關(guān)的抗炎制劑進行脊髓硬膜外腔和灌胃給藥干預，應用酶聯(lián)接免疫吸附反應（ELISA）、逆轉(zhuǎn)錄－多聚酶鏈式反應（RT—PCR）實驗技術(shù)，分別檢測血清中TNF—α（腫瘤壞死因子α）、IL—4（白介素4）和IL-10（白介素10）含量和炎性關(guān)節(jié)中滑膜和軟骨組織TNF—α、IL-1β（白介素1β）、IL—6（白介素6） mRNA的表達水平。 結(jié)果：⑴通過對實驗大鼠進行行為學評分，證明HWTX—Ⅰ硬脊

4、膜外腔用藥能明顯減輕炎性骨關(guān)節(jié)損傷大鼠損傷側(cè)關(guān)節(jié)的疼痛感，其效果相對于臨床上常用的鈣通道拮抗劑布洛芬更加明顯。⑵通過對實驗大鼠進行損傷側(cè)關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)周長測量，證明HWTX—Ⅰ硬脊膜外腔用藥能明顯減輕炎性骨關(guān)節(jié)損傷大鼠的關(guān)節(jié)腫脹程度，其效果相對于臨床上常用的鈣通道拮抗劑布洛芬更加明顯。⑶ELISA法檢測到血清中TNF—α在非用藥組的濃度明顯高于HWTX—Ⅰ用藥組和布洛芬用藥組，IL—4的濃度則表現(xiàn)為非用藥組明顯低于HWTX—Ⅰ用藥組和布洛芬用

5、藥組，而IL-10在血清中的濃度以HWTX—Ⅰ用藥組最高，非用藥組的IL-10濃度明顯低于HWTX—Ⅰ用藥組，但與布洛芬用藥組無明顯差別。⑷RT—PCR法檢測滑膜和軟骨細胞中TNF—α、IL-1β、IL—6 mRNA的表達水平以非用藥組最高，布洛芬用藥組次之，HWTX—Ⅰ用藥組最低，布洛芬用藥組、HWTX—Ⅰ用藥組與非用藥組之間存在非常顯著性差異（P<0.01）。 結(jié)論：①通過對實驗大鼠進行行為學評分，證明HWTX—Ⅰ硬脊膜外腔

6、用藥能明顯減輕炎性骨關(guān)節(jié)損傷大鼠損傷側(cè)關(guān)節(jié)的疼痛感，其效果相對于臨床上常用的鈣通道拮抗劑布洛芬更加明顯。②通過對實驗大鼠進行損傷側(cè)關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)周長測量，證明HWTX—Ⅰ硬脊膜外腔用藥能明顯減輕炎性骨關(guān)節(jié)損傷大鼠的關(guān)節(jié)腫脹程度，其效果相對于臨床上常用的鈣通道拮抗劑布洛芬更加明顯。③HWTX—Ⅰ硬脊膜外腔用藥可下調(diào)炎性骨關(guān)節(jié)損傷大鼠血清中TNF—α的濃度，并上調(diào)血清中IL—4、IL-10的濃度，其效果相對于臨床上常用的鈣通道拮抗劑布洛芬更加明顯