肝星狀細胞的分離與細胞損傷對成肌纖維細胞形態(tài)和極性轉變的影響.pdf

1、肝纖維化（hepatic fibrosis）是指在慢性肝病的影響下，肝臟內(nèi)彌漫性細胞外基質（特別是膠原）的過度沉積。而慢性肝病的愈傷反應過程中肝星狀細胞（hepaticstellate cells，HSC）扮演著十分重要的角色。在正常的肝臟中，肝星狀細胞是靜止的非肝實質細胞，主要的作用是儲存維生素A和保持正常的基底膜成分。但是很多體內(nèi)外的實驗都表明，一旦HSC 受到外界信號的刺激，HSC 便失去儲存的維生素A，變成一個快速增殖，表達Ⅰ型

2、膠原的細胞。
　　 本文在參考文獻和總結別人經(jīng)驗的基礎上，取成年雄性SD大鼠，用鏈蛋白酶、膠原酶在體門靜脈灌注肝臟消化大鼠肝臟細胞，經(jīng)PERCOLL密度梯度離心分離肝星狀細胞。臺酚藍拒染實驗鑒定細胞活力，a-SMA 蛋白免疫細胞化學染色鑒定細胞純度。為后續(xù)實驗的進行打下了基礎。
　　 本文采用本實驗室已經(jīng)熟練掌握的異源蛋白植入法，將異源蛋白植入1.5Kg新西蘭大白兔腹腔中，獲得原代成肌纖維細胞。并以高細胞密度種植在蓋破片

3、上，對其進行機械損傷，研究損傷對成肌纖維細胞的形態(tài)和方向的影響。
　　 組織損傷歸根結底是細胞損傷，細胞的損傷造成2種病變現(xiàn)象：一是組織功能缺失，二是細胞死亡后形成的間隙會改變組織的空間構象。細胞死亡形成間隙，從力學角度講即為細胞間預應力的破壞。這會給細胞一個信號并使細胞做出響應。
　　 本文從預應力破壞角度出發(fā)，力求在體外培養(yǎng)條件下對細胞造成機械損傷，使用生物力學、細胞生物學、免疫組織化學、計算機圖像處理等多種研究方法

4、，觀察預應力的破壞對細胞的形態(tài)和方向的影響。使用SPSS 等軟件對實驗中涉及到的細胞角度等進行分析。
　　 主要結論如下:
　　 ①取成年雄性SD 大鼠，用鏈蛋白酶、膠原酶在體門靜脈灌注肝臟消化大鼠肝臟細胞，經(jīng)PERCOLL 密度梯度離心分離肝星狀細胞。臺酚藍拒染實驗鑒定細胞活力，a-SMA 蛋白免疫細胞化學染色鑒定細胞純度。
　　 ②將異源蛋白植入1.5Kg 新西蘭大白兔腹腔中，獲得原代成肌纖維細胞。并以高細胞