1、Axin與tankyrase2相互作用關(guān)系的初步研究;2、RU486作為PPARr激動(dòng)劑的性質(zhì)和功能的研究.pdf

1、Tankyrase是一種進(jìn)化上保守,多元化的蛋白,它由于被發(fā)現(xiàn)能夠影響端粒結(jié)合蛋白對(duì)端粒的穩(wěn)定作用,而作為與衰老和癌癥密切相關(guān)的蛋白,成為繼端粒酶后又一個(gè)細(xì)胞癌變機(jī)制和癌癥治療研究的新熱點(diǎn)。Axin則是一種具有多功能結(jié)構(gòu)域的構(gòu)架蛋白,它可與多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的重要蛋白相互作用,并以此調(diào)控細(xì)胞命運(yùn)和抑制腫瘤發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)Tankyrase2(Tnks2)能夠通過與Axin相互作用,經(jīng)由泛素-蛋白酶體途徑促進(jìn)Axin的降解而激活Wnt信號(hào)通路

2、。同時(shí),課題組也發(fā)現(xiàn)Axin能夠與Tnks2和KIF3A結(jié)合形成三聚體而促進(jìn)胰島素誘導(dǎo)的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut4的轉(zhuǎn)座。本論文中,從結(jié)構(gòu)生物學(xué)的角度對(duì)這兩種重要蛋白的相互作用方式進(jìn)行了研究。發(fā)現(xiàn)Axin通過氨基端aa1-81與Tnks2 ankyrin結(jié)構(gòu)域中的aa23-360和aa490-798區(qū)域發(fā)生相互作用。Axin(1-81)與Tnks2(23-360)和Tnks(490-798)在細(xì)胞體內(nèi)和體外都能形成穩(wěn)定的復(fù)合體。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)

3、Axin和Tnks2的結(jié)合并不是1:1的,應(yīng)該至少有2個(gè)或2個(gè)以上的Axin能同時(shí)與Tnks2結(jié)合。此前,在已知的為數(shù)眾多的Axin相互作用蛋白中并沒有發(fā)現(xiàn)能夠與Axin的aa1-81區(qū)域結(jié)合的蛋白,并且對(duì)結(jié)構(gòu)域進(jìn)行比對(duì)的過程中也沒有發(fā)現(xiàn)aa1-81存在任何已知的功能結(jié)構(gòu)域。其與Tnks2相互作用的發(fā)現(xiàn)無疑為對(duì)Axin功能的進(jìn)一步研究提供了線索。還對(duì)Tnks2和Tnks2/Axin蛋白復(fù)合體進(jìn)行了結(jié)晶,雖然目前還沒有取得可供衍射的蛋白晶

4、體,但是對(duì)篩選情況進(jìn)行的分析為今后進(jìn)一步優(yōu)化結(jié)晶條件提供了參考。未來如果能獲得Tnks2/Axin復(fù)合體的結(jié)晶,就能夠?qū)@兩種生物大分子的結(jié)構(gòu)關(guān)系進(jìn)行研究,找出其可能的作用機(jī)制,從而為其生理學(xué)功能的深入研究提供參考和依據(jù)。
　　 PPARY(過氧化物酶體增殖激活受體Y)是配體依賴的轉(zhuǎn)錄因子核受體超家族中的一員。它是一種與代謝相關(guān)的重要轉(zhuǎn)錄因子,是脂肪細(xì)胞分化和糖代謝的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,研究發(fā)現(xiàn)它在炎癥反應(yīng),癌癥,動(dòng)脈粥樣硬化,骨形態(tài)

5、發(fā)生等多種生理活動(dòng)中都起著重要的調(diào)節(jié)作用。廣為人知的糖尿病治療藥物TZDs正是PPARy的一種高親和性配體。本論文提出并驗(yàn)證了一種獨(dú)特的PPARy激動(dòng)劑,RU486。RU486是孕激素受體的配體,目前被大量運(yùn)用于生殖醫(yī)學(xué)中。發(fā)現(xiàn)RU486能夠強(qiáng)烈激活PPARY的轉(zhuǎn)錄活性,誘導(dǎo)PPARY與輔激活因子的結(jié)合,并引起PPARY-輔抑制因子復(fù)合體的解離。RU486能夠在3T3-L1細(xì)胞中激活PPARY,顯著提高PPARY及其目的基因的表達(dá),并促

6、進(jìn)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞,但誘導(dǎo)分化能力顯著低于rosiglitazone。它還能夠激活巨噬細(xì)胞中PPARY的轉(zhuǎn)錄活性,從而誘導(dǎo)與脂類代謝相關(guān)的目的基因CD36和LXRα的表達(dá)。同時(shí),RU486對(duì)PPARY的作用都受到PPARY拮抗劑GW9662的抑制,從另一個(gè)角度說明了RU486是通過或者至少是部分通過與PPARY的直接作用而發(fā)揮作用的。此外,從結(jié)構(gòu)生物學(xué)角度對(duì)PPARY與RU486相互作用分子機(jī)制的研究表明RU486的